הפרוטוקול מאפשר ייצוג וניתוח לא פולשניים ברזולוציה גבוהה של תפקוד הלב של דגי הזברה הבוגרים. שיטה זו יכולה לשמש לאימות מודלים של מחלות לב למבוגרים ומסכי תרופות פוטנציאליים. טכניקה זו מאפשרת מיקום מהיר של הדגים להדמיה נכונה המספקת תוצאות מדויקות ותרבותיות.
זה לא פולשני ומבוצע מתחת למים המאפשר התאוששות מהירה של הדגים. כדי להגדיר את הפלטפורמה לרכישת תמונה, השתמש במספריים קטנים או באזמל כדי לבצע חתך על ספוג בתדרך השעה 12. מניחים את הספוג במיכל זכוכית.
באמצעות סרט הדבקה דו-צדדי, הדבק את מיכל הזכוכית המכיל את הספוג בפלטפורמת האולטרסאונד. ודא שמכל הזכוכית נמצא במרכז הרציף ומצורף היטב. הטה את הפלטפורמה קדימה כ-30 מעלות באמצעות הידית בצד שמאל של מחזיק הפלטפורמה.
ממלאים את מיכל הזכוכית בכ-200 מיליליטר של מי מערכת דגים המכילים 0.2 מיליגרם למיליליטר טריקאין מתנסולפונט. הכנס את מתמר בתוך מחזיק micromanipulator בתחנת הרכבת העובדת מפנה את הרץ של מתמר לכיוון המפעיל. שמור את המערך במקביל לקרקע עם הצד העובד אורך ביחס לבמה.
השאירו מספיק מקום על 10 ס"מ משני הצדדים עבור מערכת הרכבת מתמר מחובר עכשיו לנוע לאורך x ו y-צירים. היכנס לתוכנה הבקרה ובחר עכבר כלי דם קטנים. צור מחקר חדש, כמו גם סדרה חדשה עבור כל בעל חיים המושרה במחקר.
לחץ על לחצן המחקר החדש הממוקם בצד הימני התחתון של המסך בדף הדפדפן. התצוגה מתחילה במצב B. באמצעות רשת דגים, להעביר את הדג לתוך מיכל קטן המכיל מי מערכת עם 0.2 מיליגרם למיליליטר של tricaine.
המתן עד שהדגים יהיו מרודמה לחלוטין ללא תנועה או ללא תגובה למגע. בעדינות ובמהירות להעביר את הדגים לתוך מיכל הזכוכית עם הספוג לתוך החתך עשה בעבר עם הצד הגחוני של הדג פונה כלפי מעלה. בעדינות להוריד את מתמר באמצעות הידית על מערכת הרכבת הצבת אותו אורך ולסגור את הצד הגחוני של הדג עם רץ של מתמר מול המפעיל.
השאירו שניים עד שלושה מילימטרים של אישור מהדגים. התאימו את הפלטפורמה ביחס מתמר באמצעות micromanipulator בכל שלושת הצירים עד לב הדג הוא דמיינו. מיד לאחר לוקליזציה של הלב, בחר או הישאר במצב B וצמצם את השדה על-ידי התקרבות כדי להשיג מבט מקרוב על הלב.
במידת הצורך, שפר את האיכות או הניגודיות של התמונה על-ידי הגדרת הטווח הדינמי ל- 45 עד 50 דציבלים. עבור אל פקדי מצב B באפשרות פקדים נוספים ולאחר מכן שמור את השינוי בהגדרות מוגדרות מראש של מצב. הקישו על קביעות מצב מוגדרות מראש לבחירת הגדרת רכישת התמונה הממוטבת בכל פעם לפני שתתחילו דימוי סדרה חדשה.
לצלם תמונות רבות ככל הרצוי במישור הציר הארוך. לאחר מכן, עבור אל דופלר צבע לגילוי זרימת הדם ורכישה. באמצעות מסך המגע, למקם את הרביע על גבי שסתום atrioventricular ולהפוך את הזרימה אשר נבדל על ידי אות צבע אדום.
צמצם את שטח הרביע ככל האפשר כדי להגדיל את קצב הפריימים. הפעל את גל הדופק דופלר לנוע כדי לדגום מהירות זרימת דם חדרית. מקם את שער נפח המדגם במרכז השסתום atrioventricular כדי לזהות את מהירות הזרימה המרבית.
אות הצבע האדום הופך צהבהב יותר. כוונן את זווית גל הדופק על המסך באמצעות אצבעות כך שהוא יתיישר עם כיוון זרימת הדם. לחץ להתחיל או לעדכן כדי להתחיל לדגום את המהירות של דם זורם לתוך החדר.
לקבוע את מהירות הזרימה על ידי הצבת צבע רביע דופלר בצומת בין החדר ואת bulbus ולהפוך את הזרימה. זה נבדל על ידי אות צבע כחול. מקם את שער נפח המדגם ממש לפני צומת בולבוס החדר ולהתאים את קו תיקון הזווית כדי להתאים את כיוון זרימת הדם.
התאימו את קו הבסיס להעלאתו בלוח מהירות הזרימה כדי לזהות לחלוטין את פסגות האות ולעקוב אחריהן. ברגע רכישת התמונה הושלמה, להשתמש בכפית ולהעביר את הדגים לתוך מערכת קבועה aerated מים ללא tricaine ולתת לדגים להתאושש. כדי לעזור להתאוששות, להשפריץ מים שוב ושוב על הזימים באמצעות פיפטה העברה כדי לקדם aeration של העברת מים וחמצן.
בדרך כלל לוקח 30 שניות עד שתי דקות לחדש את תנועת הזימים ואת השחייה. פתח את תוכנת ניתוח התמונות. בחרו תמונה ולחצו על סמל עיבוד התמונה.
התאימו את הבהירות והניגודיות של התמונה כדי לאפשר הדמיה ברורה של קירות חדריים או תבנית זרימת דם. בעזרת התמונה במצב B, פתחו את הרשימה הנפתחת מהאפשרות של הציר הארוך הצנחני במדידות חבילת הלב. בחר מעקב LV ולעקוב אחר הקיר הפנימי חדרית ב systole ו diastole כדי להשיג את האזור חדרית systole ו diastole ונפח דיאסטולי ונפח סיסטולי סוף.
במחקר זה, תמונות במצב B אפשרו מעקב אחר הקיר הפנימי בחדרים ב- systole ו diastole וקבלת נתונים ממדיים כגון ממדים תא וקיר. נתונים פונקציונליים הושגו גם כגון קצב לב, נפח שבץ, תפוקת לב, כמו גם פרמטרים של פונקציה סיסטולית חדרית כולל שינוי אזור שבר ושבר פליטה. מדידות ברמה של שסתום atrioventricular באמצעות תמונות מצב דופלר צבע סיפק גם זרימה חדרית ומהירות דם זרימה.
בהתבסס על תמונת דופלר גל הדופק, ערך קצב הלב נוצר על ידי מעקב אחר שלוש פסגות זרימה אורטיות רצופות. הדבר החשוב ביותר הוא למקם את פלטפורמת אולטרסאונד ואת הדגים כראוי עבור הדמיה מדויקת כדי למזער את החשיפה דגים tricaine. שיטות נוספות לתמיכה בהליך זה כוללות אלקטרוקרדיוגרמה דגים לגילוי מהיר של תפקוד לקוי של הלב כמו הפרעות קצב או שיטות היסטולוגיה להערכת מבנה רקמת הלב או מוות של תאים.
טכניקות אלה מאפשרות הערכה של תפקוד הלב של דגי הזברה ולהקים פנוטיפ לב במודלים למחלות לב זברה. זה גם מאפשר לבדוק תרופות חדשות, ללמוד פגיעה בלב ויכולת התחדשות. טריקאין MS-222 הוא גירוי בעור, בעין ובנשימה.
בעת הכנת פתרון tricaine, ציוד מגן צריך לכלול מסכת אבק, מגן עיניים וכפפות.
