טכניקה זו יכולה לענות על שאלות פונקציונליות חשובות על תגובות עצביות לטעום הגרעינים geniculate, חלק מכריע של מסלול הטעם צ'ורדה טימפאני הפנימי. טכניקה זו יכולה לשמש לניטור התגובות בזמן אמת של נוירונים בודדים מרובים בניסוי ניסיוני יחיד, שכן תאים שנרשמו לכל חיה גבוהים באופן משמעותי ממה שנצפו בדרך כלל בשיטה האלקטרופיזיולוגית. עם העכבר רכוב על עמוד הראש בתנוחת העל-אדמה על כרית חימום, בצע חתכת קו האמצע של שני ס"מ בעור מעל הגרון, מעצם החזה לסנטר.
ולחזר את העור ואת בלוטות תת-מקסילארי לחשוף באופן מלא את השרירים digastric. לאחר איתור התפר בשריר הפרצ'אל, להפריד את התפר עם ניתוח קהה ולבטל את הרקמה כדי לפתוח אותו. חותכים בזהירות פתח בחלק העליון של קנה הנשימה גדול מספיק כדי להתאים חתיכת צינורות פוליאתילן מבלי לחתוך יותר ממחצית הדרך דרך הקוטר של קנה הנשימה ולהכניס את הצינורות לתוך קנה הנשימה לכיוון הריאות.
מקם מחדש את המפסקים כדי לשחרר את השרירים paratracheal ולבטל את בלוטות מקסילארי המשנה. לאחר מכן, השתמש בכמות קטנה של דבק וטרינרי כדי לאטום את השרירים paratracheal יחד מעל הצינור. כדי לשבור את הבולה הטימפנית, להקניט בעדינות את השריר digastric הרצוי כלפי מעלה ולמשוך את רקמת החיבור לגזרים.
לעשות חותך בקצה האחורי של השריר, הימנעות כלי הדם. ולמשוך לאחור לאחור עד נקי של bulla טימפני. הטה את הראש מעט לאחור כדי להרים את הבולה הטימפנית ולאתר את הענף של העורק הראשי הקדמי לנקודת הכניסה האחורית של השריר digastric.
יש לפשל רק אחורי לכלי הדם הזה למבנה הקמור של הבולה הטימפנית ולאתר תפר בשרירים. באמצעות שני סטים של מלקחיים עדינים, לנתח קהה בתפר עד העצם של bulla tympanic גלוי ולהשתמש מפסקים כדי לשמור על תצוגה ברורה של העצם. אתר את התפר פועל הקדמי כדי אחורי על bulla ולהשתמש בדיקה כירורגית לתקוע חור בעצם במרכז התפר, ולאחר מכן, להשתמש קבוצה של מספריים קצה עדין לחתוך אזור מעגלי בעצם, דואג לא לחתוך כלי דם הקדמי והאחורי אל או מתחת bulla.
כדי לחשוף את ההיגיינה, אתר את השבלול. החלק האחורי של השבלול הוא שריר הטנסור טימפני. השתמש מספריים קפיץ לחתוך ולהסיר את השריר הזה.
השתמש בדיקה כירורגית כדי לתקוע חור בצהרת שבלול ומיד להשתמש בשאיבה כדי לשאוף כל נוזל שזורם מתוך החור. להגדיל את החור שבלול, דואג לא לפגוע בכלי הדם האופפת את השבלול, לקצה האחורי והלבטי. ולהטות את ראשו של העכבר קדימה כדי לאתר את החור בעצם הטמפורלית מתחת למבנה שבלול לשעבר.
שימו לב לרכס החם לחור שיושב ישירות מעל העצב השביעי. ולהכניס בדיקה כירורגית לתוך החור כדי לאפשר לעצם הטמפורלית להיות מורמת בזהירות כדי לחשוף את העצב השביעי. אם geniculate אינו גלוי לחלוטין, בעדינות להטות את הראש של החיה בחזרה ולנסות למשוך את העצם האחורי אל העצב.
אם הגרעינים עדיין מוסתרים, למשוך את העצם יותר מלמטה, דואג לא למקם את הגשוש עמוק מתחת לעצם, כמו זה עלול לפגוע geniculate. כדי להפעיל את לוח הטעם, השתמש בשאיבה כדי להסיר את הנוזל מעל geniculate ולהניח את העכבר על כרית סופגת תחת מיקרוסקופ ניתוח. השתמש בחור שנותר בבולה, החור בעצם הטמפורלית, ואת העצב השביעי כדי לאתר את גנגליון geniculate.
ולהשתמש במסנן FITCGFP על היקף אפיפלואורסצנטי כדי לבדוק עבור GCaMP בודדים מבטאים גנגליון geniculate נוירונים. מניחים את המחט מחלק עבור קו אחד טעים בחוזקה לתוך הפה של החיה ומניחים צלחת פטרי מתחת לפה כדי לתפוס כל נוזל. סנכרן את תחילת הקלטת הווידאו עם תחילת המצגת הטעונה, צפייה בשידור החי לקבלת תגובות, סחף וחלחול במהלך ההקלטה.
אם חלחול מתרחשת, שאיבה את הנוזל עד הנוף של geniculate ברור ומעביר מחדש את הטעים. אם מתרחשת סחף, בדוק שכל חלקי הראש מתהדקים היטב. אם לא מתרחשת תגובה, ודא שהנוזל זורם ושהמיקרוסקופ והמצלמה מתמקדים במיקום הנכון מבלי שמשהו יטשטש את שדה הראייה.
כאשר כל הניסויים הרצויים הושלמו, הקל בעדינות על המפסקים וחזר על החשיפה והניתוח הטעים בצד השני של החיה. כפי שנצפו, גירויי טעם להחיל על הלשון צריך לגרום לעלייה ארעית מהירה פלואורסצנטיות GCaMP, גרימת שינוי ניכר בבהירות בקרב הנוירונים מגיבים. ניתוח קטעי הווידאו פלואורסצנטיים מאפשר יצירת עקבות המתאימים לשינויים בפלואורסצנטיות על התגובה הבסיסית בתוך אזורים בודדים של עניין לאורך זמן.
שינויים בעוצמת הפלואורסצנטיות מעל רמת הסף נחשבים לתגובה חיובית. בנוסף לפגיעה בגרעעים, חשוב להימנע מדימום. אם מתרחש דימום, המתן לקריש הדם לפני החלת תמיסת מלח ושאיבה כדי להסיר את הדם משדה הראייה.
הדמיה של הגרעינים geniculate אפשרה לחוקרים למדוד ישירות את התגובות של נוירונים לגירויים דמויי טעם ולזהות נוירונים אלה עם כלים כגון GCaMP תלוי Cre.
