פרוטוקול זה יכול לעזור לשפר את תפוקת האיתורים מלב עכבר מנוזל. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא כי מיוציט פרזדורים חדרית יכול להיות מבודד בו זמנית תחת אותו מצב עיכול. שיטה זו יכולה לספק תובנה על המנגנונים של מחלות לב ברמה התאית והתת-תאית.
לאחר המתת חסד של עכבר C57 שחור C57 זכר בן שמונה עד עשרה שבועות, השתמש במלקחיים רקמה כדי להרים את העור של xiphoid. לאחר מכן באמצעות מספריים רקמה, לבצע חתכים לרוחב קטין דרך העור. בצע ניתוח בוטה בין העור לבין fascia.
הרחב את חבטת העור לכיוון הסרן בצורת V משני הצדדים והמשיך את ההסתה דרך בית החזה. לאחר מכן באמצעות מלקחיים רקמה, להדק את החזה ולהסיט את בית החזה כלפי מעלה כדי לחשוף באופן מלא את הלב והריאות. בעזרת מלקחיים מעוקלים, לקלף את קרום הלב.
אם בלוטת התימוס מכסה את כלי הדם הגדולים, השתמש בשני מלקחיים מעוקלים כדי לקרוע את בלוטת התימוס לכיוון שני הצדדים, ואז בעדינות למשוך את בסיס הלב לכיוון הזנב עד שאור העורקים ועורק הענף שלו נראים ככלי דם בצורת Y. חתוך את העורקים בעורק הראשי המשותף השמאלי, ואז חתוך את העורק הברז'יוצפלי. Excise את הלב ומיד לטבול אותו בצלחת פטרי המכיל הפתרון של טיירוד לשטוף ולשאוב את הדם שיורית.
לאחר מכן מעבירים את הלב לצלחת פטרי אחרת המכילה את הפתרון הראשון. תחת מיקרוסקופ סטריאו, באמצעות מספריים איריס בסדר, לקצץ כל רקמה עודפת. לגרש בועות אוויר מהמזרק.
לאחר מכן בסיוע שני מלקחיים צמיגים ישרים, בצע קנוניציה מדרדרת של בתחום האב העורקים, תוך הקפדה על כך שכל תהליך הקנוניציה מבוצע מתחת למשטח הנוזלי. התאם את עומק הצינור כך קצה הצינורית הוא אבי העורקים עולה, דואג לא לחדור את שסתומי אבי העורקים. ואז עם תבל 3-O טרום קשר, ליג את העורקים ל חריץ הצינורית.
הזריקו בעדינות את התמיסה הראשונה מהמזרק כדי לשטוף את שאריות הדם. לאחר מכן חברו את הלב המנוטרל למנגנון לנגנדורף, תוך דאגה לא להכניס בועות אוויר ללב. לאחר חיבור הלב המקושת למנגנון לנגנדורף, תחדירו ללב את הפתרון הראשון למשך כשתי דקות.
באמצעות פיפט פוליאתילן סטרילי חד פעמי, לצייר כ 2.5 מיליליטר של פתרון שלוש מראש למלחמה אותו באמבט המים לשימוש מאוחר יותר. לאחר מכן כדי לעכל את הרקמות, לטבול את הלב עם הפתרון הנותר שלוש במשך כ 11 עד 12 דקות. לאחר שתי הדקות הראשונות של זלוף עם פתרון שלוש, למחזר את הפתרון perfusate למאגרים perfusate על ידי המשאבה peristaltic לשימוש חוזר עד העיכול הושלם.
כאשר הלב הופך נפוח, הופך מעט חיוור ו flacid, באמצעות מלקחיים שיניים, בעדינות לצבוט את שריר הלב. אם חותם גלוי, לסיים את העיכול ולנתק את הלב מן המנגנון. כדי לבודד את מיוציטים עורקיים חדריים, להשתמש במלקחיים כדי להסיר את החדרים ואת atria ומניחים אותם בצלחות פטרי שונות.
לאחר מכן מוסיפים את הפתרון שהתחמם מראש שלוש לשתי המנות. באמצעות מלקחיים קהים, טריטוריאט את הרקמות למרקם עכיר, ולאחר מכן בעדינות pipette הרקמה אפילו לעיכול מבלי להציג בועות אוויר. כדי לעצור את פעילות האנזים הנותרת, באמצעות פיפטה, להעביר את הרקמה המעוכלת עכירה לפתרון ארבע, ולאחר מכן צנטריפוגה במשך 20 שניות ב 192 פעמים G.לאחר הסרת supernatant, resuspend משקעי התא בתמיסה חמש.
כדי למנוע פרדוקס סידן ועומס יתר של סידן, להחזיר את הסידן בצורה צעד על ידי הוספת בהדרגה של 50 microliters של 100 מילימולר לליטר סידן כלורי להשעיית התא. לאחר שכל הסידן כלורי נוסף, אחסן את התאים בתמיסה של טיירוד למחקר מהדק התיקון. עומק הקנולציה קשור לזלוף של האטריה ונספחיה.
כאשר קצה הצינורית נמצא באפותר העורקים העולה, שני נספחי האיתור מנופחים המעידים על זלוף אטריה מספיק. עם זאת, כאשר קצה הצינורית נמצא בשורש בים העורקים, שני נספחי פרוזדורים הם wizened, המציין זלוף לא מספיק. מיוציטים של אטרזדורים מבודדים על ידי קנולטציה ב אבי העורקים העולה היו בעלי שיעורי הישרדות גבוהים יותר מאלה המבודדים על ידי קנון בשורש אבי העורקים הן לפני ואחרי החזרת הסידן.
לעומת זאת, לא היה הבדל בשיעורי ההישרדות של מיוציטים חדריים מבודדים על ידי cannulation ב אבי העורקים העולה או השורש אבי העורקים הן לפני ואחרי החזרת סידן. הקלטת המהדק של כל התא של זרם הנתרן במיטוציטים המבודדים של האיזדורים והחנימה, כמו גם הצפיפות הנוכחית מאשרים כי איכות התאים המבודדים עומדת בדרישות לניסויים אלקטרופיזיולוגיים. בעת חוצה את העורקים, הקפד לשמור על בלוטה מספקת עבור קשירה.
אחרת, הצינורית עלולה לחדור את שסתום אבי העורקים לאחר קשירה.
