עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81973569, 82274207 ו -82104533), פרויקט קידום המחקר המלומד Xinglin של אוניברסיטת צ'נגדו של TCM (XKTD2022013), ואת תוכנית המחקר והפיתוח המפתח של נינגשיה (2023BEG02012).

Rhodiola crenulata נאסף מהר השלג Zhuoda, מחוז Ganzi, המחוז האוטונומי הטיבטי Ganzi, מחוז סצ'ואן, סין (N 31.44570°, E 99.96086°, 4892 מ '). הצמחים מאומתים כמקוריים על ידי פרופסור יי ז'אנג מבית הספר לרפואה אתנית, אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית.
1. אוסף של Rhodiola crenulata
<ol><li>צלמו את מפת סביבת המחיה של Rhodiola crenulata.</li>
	<li>צלמו את כל הצמח, העלים, הקליקס וקנה השורש של Rhodiola crenulata.</li>
	<li>השתמשו בשפכטל כדי לנקות את העשבים השוטים והאבנים השבורות בטווח של 1 מ' מ-Rhodiola crenulata כדי להבטיח את הכרייה החלקה שלאחר מכן.</li>
	<li>חפרו את האדמה עם מעדר עד שכל הריזוספרה נראית ואספו את שורש הברז. הערה: יש לאסוף את השורשים וקני השורש של Rhodiola crenulata המשמשים בחלקי מרפא בסתיו, כאשר גבעולי הפרח נובלים.</li>
</ol>2. זיהוי אופייני
<ol><li>שימו לב לתכונות המראה של Rhodiola crenulata בעין בלתי: שורשים גליליים וקצרים וקני שורש, משטח חום, אפידרמיס צהוב קרום עם דפוס ורוד, ופרוסות כתומות-אדומות או בורדו.</li>
	<li>זהה אותו על ידי ריח: זה נותן ריח ריחני כאשר ליד האף.</li>
	<li>זהה אותו לפי טעם: קח חתיכה קטנה של שורש לתוך הפה, תחילה ללגום ולאחר מכן ללעוס, טעם מעט מריר, ואז מתוק.</li>
</ol>3. זיהוי מיקרוסקופי של גרגרי עמילן באבקה רפואית
<ol><li>מוציאים את האדמה על פני השטח של Rhodiola crenulata עם מברשת, לשים אותו בתנור ב 40 °C, ולהפוך את עשבי תיבול כל 24 שעות. הערה: קלות השבירה של חומרים רפואיים נחשבת לתקן לייבוש לחות.</li>
	<li>אבקו את חומרי המרפא המיובשים באמצעות מכונת אבקה וסננו את האבקה הרפואית באמצעות מסננת מס' 3 (ראו טבלת חומרים).</li>
	<li>קחו שקופית נקייה (ראו טבלת חומרים), חפרו את האבקה עם מחט לניתוח (ראו טבלת חומרים) והניחו אותה באופן שווה על שליש מהשקופית בטווח של 2 מ"מ.</li>
	<li>השתמשו בטפטפת זכוכית (ראו טבלת חומרים) כדי להוסיף טיפת מים שעברו דה-יוניזציה לאבקה. השתמשו בפינצטה (ראו טבלת חומרים) כדי להחזיק קצה אחד של הכיסוי (ראו טבלת חומרים) כדי לגעת במהירות ברמת הנוזל ולכסות את האבקה. הערה: השתמש במחט אנטומית כדי לערבב בעדינות מים ואבקה רפואית כדי להבטיח ערבוב דגימה אחיד. לא אמורות להיות בועות אוויר בין המגלשה, האבקה וזכוכית הכיסוי.</li>
	<li>פתח את המיקרוסקופ (ראה טבלת חומרים) והנח את השקופית בשלב 3.4 על הפלטפורמה כדי לאבטח אותה. כוונן את מקור האור ואת ספירלת המיקוד הגסה כדי לראות את האבקה. התאם את הספירלה הפרפוקלית העדינה עד שהרקמות נראות בבירור. עברו למטרה של פי 40 והתבוננו בגרגרי העמילן. הערה: עמילן את הגרגרים המוצגים כגרגרים בודדים או מרובים, ונקודת הטבור מופיעה בצורת עצם הרינג או סדק.</li>
</ol>4. זיהוי מיקרוסקופי של קטטרים, תאי שעם, סיבים, תאי פרנכימה מעץ ומסת פיגמנט באבקה רפואית
<ol><li>קח שקופית נקייה (ראה טבלת חומרים), חפור את האבקה עם מחט כירורגית (ראה טבלת חומרים), ומקם אותה בשליש מהשקופית.</li>
	<li>השתמשו בטפטפת זכוכית (ראו טבלת חומרים) כדי להוסיף טיפת כלורל הידרט (ראו טבלת חומרים) לאבקה. קח את המגלשה עם פינצטה (ראה טבלת חומרים) וחמם אותה במנורת האלכוהול שלוש פעמים, בכל פעם למשך שנייה אחת. הערה: יש להימנע מבועות במהלך החימום. הנוזל נשאר לא זורם, מה שמעיד על כך שהחדירה הושלמה.</li>
	<li>השתמשו בטפטפת זכוכית כדי להוסיף טיפת גליצרין (ראו טבלת חומרים). השתמשו בפינצטה כדי להחזיק קצה אחד של הכיסוי כדי לגעת במהירות ברמת הנוזל.</li>
	<li>פתח את המיקרוסקופ והנח את המגלשה על הפלטפורמה כדי לאבטח אותה. כוונן את מקור האור ואת ספירלת המיקוד הגסה כדי לראות את האבקה. התאם את הספירלה הפרפוקלית העדינה עד שהרקמות נראות בבירור. התבוננו בצנתר, בתאי השעם, בסיבים, בתאי פרנכימה מעץ ובבלוק פיגמנט על ידי מעבר לעדשה אובייקטיבית פי 40. הערה: מצולע מצולע או ארוך של תאי שעם, כלי ספירלי בעל מבנה סלילי ברור, פרנכימה של קסילם המכילה גבישי חול של סידן אוקסלט, וגוש פיגמנט אדום או חום-אדום.</li>
</ol>5. הכנת דגימות כרומטוגרפיות בשכבה דקה (TLC) של Rhodiola crenulata והפניה שלה
<ol><li>מניחים את נייר השקילה על האיזון (ראו טבלת חומרים) ושוקלים 3 גרם אבקת רודיולה קרנולטה.</li>
	<li>קח את האבקה לתוך בקבוק חרוטי 100 מ"ל (ראה טבלה של חומרים), ולהוסיף 25 מ"ל מתנול עם פיפטה בטן גדולה (ראה טבלה של חומרים). הכניסו את הבקבוק החרוטי למכשיר האולטרסוני. כוונו את ההספק ל-250 ואט, את התדר ל-40 קילו-הרץ ואת הזמן ל-30 דקות (ראו טבלת חומרים) והפעילו את המכשיר. הערה: מטרת מכשיר האולטרסאונד היא להבטיח כי אבקת Rhodiola crenulata מומסת לחלוטין מבלי להשפיע על התוצאות של ניסויים כרומטוגרפיים בשכבה דקה לאחר מכן.</li>
	<li>הסר את הבקבוק החרוטי ושטוף את הבקבוק החיצוני במים זורמים לטמפרטורת החדר (RT).</li>
	<li>לשאוף 800 μL של נוזל מוכן בשלב 5.3 עם מזרק 1 מ"ל. סנן עם קרום מסנן מיקרונקבובי 0.22 מיקרומטר (ראה טבלת חומרים) ואסוף 400 מיקרוליטר של תמיסת דגימה באמצע הזרם של Rhodiola crenulata בבקבוק דגימה כרומטוגרפית.</li>
	<li>שקלו והוסיפו 2 מ"ג של סלידרוסיד, טירוסול וחומצה גאלית (ראו טבלת חומרים) ל-3 בקבוקים חרוטיים נפרדים של 100 מ"ל, בהתאמה. מוסיפים 25 מ"ל מתנול עם פיפטה בטן גדולה לכל בקבוק חרוט.</li>
	<li>הכניסו את הבקבוק החרוטי למכשיר האולטרסוני, כוונו את ההספק ל-250 ואט, את התדר ל-40 קילוהרץ ואת הזמן ל-30 דקות, וחזרו על שלב 5.3 (ראו טבלת חומרים).</li>
	<li>לשאוף 800 μL של נוזל מוכן בשלב 5.6 עם מזרק 1 מ"ל. סנן עם קרום מסנן מיקרונקבובי 0.22 מיקרומטר (ראה טבלת חומרים) ואסוף 400 מיקרוליטר של תמיסה סטנדרטית של סלידרוסיד, טירוסול וחומצה גאלית באמצע הזרם בבקבוקי דגימה כרומטוגרפיים תואמים.</li>
</ol>6. זיהוי TLC
<ol><li>פיפטה טריכלורומתאן (5 מ"ל), אתיל אצטט (4 מ"ל), מתנול (2 מ"ל) וחומצה פורמית (0.5 מ"ל) (ראו טבלת חומרים). יש להוסיף לצד אחד של גליל הכרומטוגרפיה בעל המיכל הכפול (ראו טבלת חומרים), לנער ולערבב באופן שווה. מכסים את ראש הגליל העליון.</li>
	<li>הניחו את החומצה הגאלית, הסלידרוזיד, תמיסת הטירוסול הסטנדרטית ותמיסת רודיולה קרנולטה על מדף הדגימות במיקומים A1-A4.</li>
	<li>הניחו את יריעת הסיליקון בגודל 5X10 ס"מ (ראו טבלת חומרים) על שולחן הדגימה. הפעל את מכונת הדגימה האוטומטית (ראה רשימת חומרים) ופתח את שסתום בקרת האוויר.</li>
	<li>פתח את תוכנת visionCATS (ראה טבלת חומרים). לחץ על New > New Folder (בשם Rhodiola crenulata sample test) > אישור. לחץ על שיטה חדשה (שם Rhodiola crenulata sample test) > אישור > ATS 4.</li>
	<li>לחץ על הגדרת שלב סיום. לחץ על עקוב אחר הקצאה כדי לערוך את התיאור (חומצה גאלית, סלידרוסיד, טירוסול ודוגמת רודיולה קרנולטה ).</li>
	<li>לחץ על HPTLC Steps. הגדר את פרמטרי השכבה הדקה (5 ס"מ x 10 ס"מ). בחר Application Type (פס), הגדר את הפרמטרים (Table 1) ולחץ על הלחצן OK .</li>
	<li>איכות מילוי/שטיפה פתוחה. סמן את מלא רק אמצעי אחסון מתוכנת. הגדר את הרמה התחתונה של הבקבוקון (מ"מ) ל- 0.5 ולחץ על הלחצן אישור.</li>
	<li>לחץ על Execute Method.</li>
	<li>לחץ על הלחצן עקוב אחר הקצאה , סמן את מרכז והגדר את הפרמטרים (טבלה 2).</li>
	<li>לחצו על הלחצן 'המשך ' לדגימה אוטומטית.</li>
	<li>כבו את מכונת הדגימה האוטומטית ואת שסתום האוויר. הסירו את יריעת הסיליקון ממכונת הדגימה האוטומטית.</li>
	<li>הכניסו את יריעת הסיליקון לצד השני של גליל הכרומטוגרפיה של המיכל הכפול בשלב 6.1, כסו את ראש הצילינדר העליון ורוו מראש למשך 20 דקות.</li>
	<li>מהדקים בעדינות את הקצה העליון של צלחת השכבה הדקה עם טוויטר, מכניסים במהירות את יריעת הסיליקון לסוכן הפיתוח ומכסים את ראש הגליל העליון. הערה: הסר את יריעת הסיליקון כאשר הקצה הקדמי המתקפל נמצא במרחק של 0.5-1.0 ס"מ מהקצה העליון של לוח השכבה הדק.</li>
	<li>לאחר שהממס האורגני מתאדה, רססו את התמיסה הכרומוגנית על פני יריעת הסיליקון בטמפרטורת החדר לקבלת תוצאות כרומוגניות. הערה: התמיסה הכרומוגנית היא תמיסה מימית המכילה 2% FeCl3 ו-1% K3[Fe(CN)6].</li>
</ol>

אפיון מיקרוסקופי וזיהוי מבוסס TLC של רודיולה crenulate

<ol>
	<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+herbal+medicine+and+nanomedicine:+Converging+disciplines+to+improve+therapeutic+efficacy+and+human+health.">Traditional herbal medicine and nanomedicine: Converging disciplines to improve therapeutic efficacy and human health.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 178, 113964 (2021).</li><li>Yin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+positive+role+and+mechanism+of+herbal+medicine+in+Parkinson's+Disease.">The positive role and mechanism of herbal medicine in Parkinson's Disease.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 9923331 (2021).</li><li>Li, F. S., Weng, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demystifying+traditional+herbal+medicine+with+modern+approach.">Demystifying traditional herbal medicine with modern approach.</a> Nature Plants. 3, 17109 (2017).</li><li>da Fonseca, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbal+medicinal+products+from+Passiflora+for+anxiety:+An+unexploited+potential.">Herbal medicinal products from Passiflora for anxiety: An unexploited potential.</a> The Scientific World Journal. 2020, 6598434 (2020).</li><li>Aziato, L., Antwi, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facilitators+and+barriers+of+herbal+medicine+use+in+Accra,+Ghana:+an+inductive+exploratory+study.">Facilitators and barriers of herbal medicine use in Accra, Ghana: an inductive exploratory study.</a> BMC Complementary and Alternative Medicine. 16, 142 (2016).</li><li>Tao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodiola+species:+A+comprehensive+review+of+traditional+use,+phytochemistry,+pharmacology,+toxicity,+and+clinical+study.">Rhodiola species: A comprehensive review of traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicity, and clinical study.</a> Medicinal Research Reviews. 39 (5), 1779-1850 (2019).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dietary+supplement+Rhodiola+crenulata+extract+alleviates+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+in+mice+through+anti-inflammation,+mediating+gut+barrier+integrity+and+reshaping+the+gut+microbiome.">The dietary supplement Rhodiola crenulata extract alleviates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice through anti-inflammation, mediating gut barrier integrity and reshaping the gut microbiome.</a> Food &amp; Function. 12 (7), 3142-3158 (2021).</li><li>Xie, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodiola+crenulate+alleviates+hypobaric+hypoxia-induced+brain+injury+via+adjusting+NF-&#954;B/NLRP3-mediated+inflammation.">Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-&#954;B/NLRP3-mediated inflammation.</a> Phytomedicine. 103, 154240 (2022).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salidroside,+a+phenyl+ethanol+glycoside+from+Rhodiola+crenulata,+orchestrates+hypoxic+mitochondrial+dynamics+homeostasis+by+stimulating+Sirt1/p53/Drp1+signaling.">Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from Rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/p53/Drp1 signaling.</a> Journal of Ethnopharmacology. 293, 115278 (2022).</li><li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+characteristics+of+Rhodiola+Crenulata+and+its+mechanism+in+acute+mountain+sickness+using+UHPLC-Q-TOF-MS/MS+combined+with+network+pharmacology+analysis.">Chemical characteristics of Rhodiola Crenulata and its mechanism in acute mountain sickness using UHPLC-Q-TOF-MS/MS combined with network pharmacology analysis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 294, 115345 (2022).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodiola+crenulata+attenuates+apoptosis+and+mitochondrial+energy+metabolism+disorder+in+rats+with+hypobaric+hypoxia-induced+brain+injury+by+regulating+the+HIF-1&#945;/microRNA+210/ISCU1/2(COX10)+signaling+pathway.">Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1&#945;/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway.</a> Journal of Ethnopharmacology. 241, 111801 (2019).</li><li>d'Avigdor, E., Wohlmuth, H., Asfaw, Z., Awas, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+status+of+knowledge+of+herbal+medicine+and+medicinal+plants+in+Fiche,+Ethiopia.">The current status of knowledge of herbal medicine and medicinal plants in Fiche, Ethiopia.</a> Journal of Ethnobiology and Ethnomedicine. 10, 38 (2014).</li><li>S&#225;nchez, M., Gonz&#225;lez-Burgos, E., Divakar, P. K., G&#243;mez-Serranillos, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-based+authentication+and+metabolomics+analysis+of+medicinal+plants+samples+by+DNA+barcoding+and+ultra-high-performance+liquid+chromatography/triple+quadrupole+mass+spectrometry+(UHPLC-MS).">DNA-based authentication and metabolomics analysis of medicinal plants samples by DNA barcoding and ultra-high-performance liquid chromatography/triple quadrupole mass spectrometry (UHPLC-MS).</a> Plants (Basel, Switzerland). 9 (11), 1601 (2020).</li><li>. Rhodiola renulata (Hook.fil &amp; Thomson) H.Ohba Available from: <a target="_blank" href="https://www.gbif.org/species/4200529">https://www.gbif.org/species/4200529</a> (2023)</li><li>. Plant + data center Available from: <a target="_blank" href="https://www.iplant.cn/">https://www.iplant.cn/</a> (2023)</li><li>. Chinese virtual herbarium Available from: <a target="_blank" href="https://www.cvh.ac.cn/">https://www.cvh.ac.cn/</a> (2023)</li><li>Cunningham, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=There+&amp;#34;ain't+no+mountain+high+enough&amp;#34;?:+The+drivers,+diversity+and+sustainability+of+China's+Rhodiola+trade.">There &amp;#34;ain't no mountain high enough&amp;#34;?: The drivers, diversity and sustainability of China's Rhodiola trade.</a> Journal of Ethnopharmacology. 252, 112379 (2020).</li><li>Wang, Q., Ruan, X., Jin, Z. H., Yan, Q. C., Tu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Rhodiola+species+by+using+RP-HPLC.">Identification of Rhodiola species by using RP-HPLC.</a> Journal of Zhejiang University. Science. B. 6 (6), 477-482 (2005).</li><li>Dong, X., Guo, Y., Xiong, C., Sun, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+two+major+Rhodiola+species+and+the+systemic+changing+characteristics+of+metabolites+of+Rhodiola+crenulata+in+different+altitudes+by+chemical+methods+combined+with+UPLC-QqQ-MS-based+metabolomics.">Evaluation of two major Rhodiola species and the systemic changing characteristics of metabolites of Rhodiola crenulata in different altitudes by chemical methods combined with UPLC-QqQ-MS-based metabolomics.</a> Molecules. 25 (18), 4062 (2020).</li><li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HPLC+fingerprint+differentiation+between+natural+and+ex+situ+populations+of+Rhodiola+sachalinensis+from+Changbai+Mountain,+China.">HPLC fingerprint differentiation between natural and ex situ populations of Rhodiola sachalinensis from Changbai Mountain, China.</a> PloS One. 9 (11), 112869 (2014).</li><li>Yu, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+evaluation+of+Tibetan+medicine+Rhodiolae+crenulatae+radix+et+rhizome+based+on+sensory+recognition+and+near+infrared+spectrum+analysis.">Quality evaluation of Tibetan medicine Rhodiolae crenulatae radix et rhizome based on sensory recognition and near infrared spectrum analysis.</a> Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , (2020).</li><li>Lv, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+determination+of+5+chemical+components+in+3+kinds+of+Rhodiola+rosea+by+HPLC.">Simultaneous determination of 5 chemical components in 3 kinds of Rhodiola rosea by HPLC.</a> China Pharmacy. 29 (18), 2515-2519 (2018).</li><li>Dong, T., Sha, Y., Liu, H., Sun, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altitudinal+variation+of+metabolites,+mineral+elements+and+antioxidant+activities+of+Rhodiola+crenulata+(Hook.f.+&amp;+Thomson)+H.Ohba.">Altitudinal variation of metabolites, mineral elements and antioxidant activities of Rhodiola crenulata (Hook.f. &amp; Thomson) H.Ohba.</a> Molecules. 26 (23), 7383 (2021).</li><li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+UHPLC+fingerprints+combined+with+chemical+pattern+recognition+analysis+in+the+differentiation+of+six+Rhodiola+species.">Application of UHPLC fingerprints combined with chemical pattern recognition analysis in the differentiation of six Rhodiola species.</a> Molecules. 26 (22), 6855 (2021).</li><li>Li, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+discrimination+of+different+Rhodiola+species+using+1H-NMR+and+GEP+combinational+chemometrics.">Metabolic discrimination of different Rhodiola species using 1H-NMR and GEP combinational chemometrics.</a> Chemical &amp; Pharmaceutical Bulletin. 67 (2), 81-87 (2019).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Hippophae+species+(Shaji)+through+DNA+barcodes.">Identification of Hippophae species (Shaji) through DNA barcodes.</a> Chinese Medicine. 10, 28 (2015).</li></ol>

למחברים אין מה לחשוף.

ישנם יותר מ -90 מינים של צמחי רודיולה בעולם, ויותר מ -60% מכל המינים נמצאים בסין, נפוצים כולל Rhodiola crenulata, Rhodiola rosea, Rhodiolas achalinensis, ו Rhodiola algida17. Rhodiola crenulata, שתועדה בחלק הראשון של הפרמקופיאה הסינית (2020), היא תרופה טיבטית מסורתית הגדלה בגובה רב. הביקוש בשוק לרודיולה ק?...

לרפואת צמחים יש היסטוריה ארוכה וניסיון יישומי עשיר בסין, והיא הייתה ההקלטה השיטתית הראשונה בקלאסיקה הצמחית1 של שנונג. גילוי הארטמיסינין המיושם על מלריה קידם את התפתחות רפואת הצמחים לשלבחדש 1. השימוש בטכנולוגיה מדעית מודרנית כדי לחשוף את המנגנון המדויק של רפואת הצמחים מגדיל את שיעור הניצול והביקוש לרפואת צמחים, ופותח שוק בינלאומי חדש עבורה 2,3,4. עם זאת, זה הוביל לשורה של השפעות שליליות. ללא אנשי מקצוע יש הבנה מעורפלת של המאפיינים של רפואת צמחים, מה שהופך את השימוש ברפואת צמחים להתמודד עם סיכון בטיחותי עצום5.
Rhodiola crenulata, אחד הצמחים של מיני רודיולה, מופץ בעיקר בטיבט, בצפון מערב יונאן ובמערב סצ'ואן בסין (איור 1)6,7. Rhodiola crenulata מכיל salidroside, tyrosol, חומצה גאלית, ותרכובות אחרות לטיפול במחלות הקשורות היפוקסי באמצעות הפונקציה של "ממריץ צ 'י וקידום זרימת הדם, ניקוי הדופק ומרגיע אסטמה"8,9,10,11. חקירת שדה מראה כי ניתן למצוא רודיולה קרנולטה באזורי הטלוס האלפיני, מדרונות הערוצים ונקיקי הסלע בגובה של 4,000-5,600 מ'. סביבת הגידול שלו קרה, מלאה בשמש ובקרינה עזה, והוא שייך למערכת האקולוגית של האחו האלפיני. רודיולה קרנולטה יכולה להיות מופצת באוכלוסיות למלריות ודמויות נקודה בהתאם לשטח הגידול, וזרימת גנים יכולה להתבצע באמצעות האבקה צולבת.
הפלת האבקה של הסוג רודיולה, חפירת אי חוקיות והסביבה האקולוגית המנוונת הופכים את רודיולה קרנולטה למין בסכנת הכחדה 6,12. לאור הערך הרפואי הגבוה של רודיולה קרנולטה, מוצרים מזויפים צפויים לזרום לשוק. מאמר זה מציג את בית הגידול של Rhodiola crenulata וכמה שיטות זיהוי מעבדה נוחות. ראשית, ראינו את סביבת הגידול של Rhodiola crenulata ואת התכונות הרפואיות שלה. שנית, המיקרו-מבנה של אבקת מרפא נצפה במיקרוסקופ. השלב האחרון הוא נקודת המפתח. המרכיבים המייצגים של Rhodiola crenulata הופרדו וזוהו על פי תכונות ספיחה או פירוק שונות של רכיבים אלה בחומר מסוים. אימות מבוסס DNA או שיטות ניתוח מטבולומיות של צמחי מרפא הן מסובכות ויקרות13. שיטות בסיסיות, נוחות וחסכוניות אלה יכולות לזהות במהירות רודיולה קרנולטה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m millipore filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic sampling machine</td>
			<td>CAMAG</td>
			<td>ATS 4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloral hydrate</td>
			<td>Fuzhou Brunei Technology Co., Ltd</td>
			<td>ST1002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromatographic&#160;sample&#160;bottles</td>
			<td>Zhejiang ALWSCI Technology Co., Ltd</td>
			<td>C0000008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical flask</td>
			<td>Sichuan Shubo Co., Ltd</td>
			<td>1121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd</td>
			<td>10211818c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting needle</td>
			<td>Shanghai Bingyu Fluid Technology Co., Ltd</td>
			<td>BY-5026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>SHIMADZU</td>
			<td>ATX124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd</td>
			<td>2022120901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd</td>
			<td>2021110801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gallic acid</td>
			<td>Chengdu Herbpurify Co., Ltd</td>
			<td>M-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10010618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High speed&#160; crusher</td>
			<td>Beijing Zhongxingweiye Instrument Co., Ltd</td>
			<td>FW-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd</td>
			<td>20230108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Chongqing Oprec Nistrument Co.,&#160; Ltd</td>
			<td>B203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide</td>
			<td>Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd</td>
			<td>7105P-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td>DHG-8145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pharmacopoeia sieve</td>
			<td>Hangzhou Xingrun sieve factory</td>
			<td>572423281330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>120302008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salidroside</td>
			<td>Chengdu Herbpurify Co., Ltd</td>
			<td>H-040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saturate tank&#160;</td>
			<td>Yancheng Liegu Technology Co., Ltd</td>
			<td>10*20 P-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel plate</td>
			<td>Yantai Jiangyou Silica Gel Development&#160; Co., Ltd</td>
			<td>HSG20211227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloromethane</td>
			<td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd</td>
			<td>20221013-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer&#160;</td>
			<td>Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>130302027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyrosol</td>
			<td>Chengdu Herbpurify Co., Ltd</td>
			<td>L-042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound equipment</td>
			<td>Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd</td>
			<td>SB-8200DTS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volumetric pipet</td>
			<td>Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>120301006</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

field collection and laboratory routine identification of rhodiola crenulata

זיהוי חומרים רפואיים הוא הנחת היסוד והערובה לבטיחות התרופה. רוב החוקרים המדעיים יעדיפו את תהליך הזיהוי הפשוט, המהיר, היעיל והזול של צמחי מרפא. Rhodiola crenulata היא תרופה טיבטית מסורתית הגדלה בגובה רב, מופצת בעיקר באזורי טיבט, יונאן וסצ'ואן בסין. לקרנולט רודיולה יש פעילויות ביולוגיות רבות, כמו נוגדות דלקת, נוגדות היפוקסיה ונוגדות חמצון, ויש לו פוטנציאל גדול להתפתחות. עם הביקוש הגובר בשוק וירידה מהירה בתוכן המשאבים, מספר רב של מוצרים מבולבלים של Rhodiola crenulata כבר מטריד אנשים. לכן, פרוטוקול זה מציג תהליך סטנדרטי לזיהוי רודיולה קרנולטה בשטח בשילוב עם בדיקות מעבדה שגרתיות. השילוב של בית גידול, תכונות מיקרוסקופיות וכרומטוגרפיה בשכבה דקה ללא ספק יזהה את רודיולה קרנולטה במהירות, ביעילות ומבחינה כלכלית, ויתרום להתפתחות מתמשכת של הרפואה הטיבטית ולבקרת האיכות של החומרים הרפואיים.

Herbal medicine has a long history and rich application experience in China, and it was the first systematic recording in Shennong&#39;s herbal classic1. The discovery of artemisinin applied to malaria promoted the development of herbal medicine into a new stage1. The use of modern scientific technology to uncover the exact mechanism of herbal medicine increases the utilization rate and demand for herbal medicine, opening a new international market for it2,3,4. However, this has led to a series of negative effects. Non-professionals have a vague understanding of the characteristics of herbal medicine, which makes the use of herbal medicine face a huge safety risk5.
Rhodiola crenulata, one of the plants of the Rhodiola species, is mainly distributed in Tibet, northwest Yunnan, and western Sichuan of China (Figure 1)6,7. Rhodiola crenulata comprises salidroside, tyrosol, gallic acid, and other compounds for the treatment of hypoxic-related diseases through the function of &#34;invigorating qi and promoting blood circulation, clearing pulse and calming asthma&#34;8,9,10,11. Field investigation shows that Rhodiola crenulata can be found in the alpine talus zones, gully slopes, and rock crevices at an altitude of 4,000-5,600 m. Its growing environment is cold, full of sunshine and intense radiation, and it belongs to the alpine meadow ecosystem. Rhodiola crenulata can be distributed in lamellar and point-like populations according to the growth terrain, and gene flow can be carried out through cross-pollination.
The pollen abortion of the genus Rhodiola, illegality excavation, and degenerated ecological environment make Rhodiola crenulata an endangered species6,12. In view of the high medicinal value of Rhodiola crenulata, counterfeit products are expected to flow into the market. This article presents the habitat of Rhodiola crenulata and some convenient laboratory identification methods. Firstly, we observed the growth environment of Rhodiola crenulata and its medicinal properties. Secondly, the microstructure of medicinal powder was observed by microscope. The last step is the key point. The representative components of Rhodiola crenulata were separated and identified according to the different adsorption or dissolution properties of these components in a certain substance. DNA-based authentication or metabolomics analysis methods of medicinal plants are complicated and expensive13. These basic, convenient, and economical methods can quickly identify Rhodiola crenulata.

מחבר זרקור: פיתוח שיטות זיהוי עבור Rhodiola crenulata וחקירת חלוקת המשאבים שלה ואת ההשפעות הפרמקולוגיות שלה

איסוף שדה וזיהוי שגרתי במעבדה של רודיולה קרנולטה

The scope of our research is centered on conducting a resource survey of ethnic medicine. Specifically, this study aims to develop a rapid and convenient methods for the identification of Rhodiola crenulata. The protocol we offer presents a cost-effective, straightforward, and rapid method for identifying various medicinal herbal materials.Our laboratory will concentrate its future research endeavors on investigation two primary areas, the distribution of research associated with Rhodiola crenulata and the pharmacological impacts of this species.

פרוטוקול ניסויי זה מתאר זיהוי ואיסוף של רודיולה בקרנולט בשטח. קרזולט רודיולה נוטה לחיות באזורי טאלוס אלפיניים, מדרונות גאיות ונקיקי סלע בגובה רב. סביבת הגידול, הצמח השלם, הפרח והעלים של קרודיולה יכולים להיות מוצגים באיור 2. לקרנולט רודיולה יש קנה שורש חו...

Watch this Scientific Journal Video about Field Collection and Laboratory Routine Identification of Rhodiola crenulata at JoVE.com

כאן אנו מתארים את הזיהוי של Rhodiola Crenulata מבית גידול, מורפולוגיה של צמחים, תכונות רפואיות, תכונות מיקרוסקופיות וכרומטוגרפיה של שכבה דקה.

The identification of medicinal materials is the premise and guarantee of drug safety. The majority of scientific researchers are bound to favor the ...

היקף המחקר שלנו מתמקד בביצוע סקר משאבים של רפואה אתנית. באופן ספציפי, מחקר זה נועד לפתח שיטות מהירות ונוחות לזיהוי של Rhodiola crenulata. הפרוטוקול שאנו מציעים מציג שיטה חסכונית, פשוטה ומהירה לזיהוי חומרי מרפא צמחיים שונים.המעבדה שלנו תרכז את מאמצי המחקר העתידיים שלה בחקר שני תחומים עיקריים, התפלגות המחקר הקשור לרודיולה קרנולטה וההשפעות הפרמקולוגיות של מין זה.

field-collection-laboratory-routine-identification-rhodiola

Research

JoVE Journal

Medicine

Field Collection and Laboratory Routine Identification of Rhodiola crenulata

442 Views.  Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. היקף המחקר שלנו מתמקד בביצוע סקר משאבים של רפואה אתנית. באופן ספציפי, מחקר זה נועד לפתח שיטות מהירות ונוחות לזיהוי של Rhodiola crenulata. הפרוטוקול שאנו מציעים מציג שיטה חסכונית, פשוטה ומהירה לזיהוי חומרי מרפא צמחיים שונים.המעבדה שלנו תרכז את מאמצי המחקר העתידיים שלה בחקר שני ת?...

Video: מחבר זרקור: פיתוח שיטות זיהוי עבור Rhodiola crenulata וחקירת חלוקת המשאבים שלה ואת ההשפעות הפרמקולוגיות שלה

The identification of medicinal materials is the premise and guarantee of drug safety. The majority of scientific researchers are bound to favor the simple, fast, effective, and inexpensive identification process of herbals. Rhodiola crenulata is a traditional Tibetan medicine grown at high altitudes, mainly distributed in Tibet, Yunnan, and Sichuan regions of China. Rhodiola crenulate possesses multiple bioactivities, such as anti-inflammatory, anti-hypoxia, and antioxidant properties, and has great potential for development. With the increasing market demand and a rapid decrease in resource content, a large number of confused products of Rhodiola crenulata have been troubling people. Therefore, this protocol introduces a standard process for the identification of Rhodiola crenulata in the field combined with routine laboratory testing. The combination of habitat, microscopic features, and thin-layer chromatography will undoubtedly identify Rhodiola crenulata quickly, efficiently, and economically, contributing to the continuous development of Tibetan medicine and the quality control of medicinal materials.

Here, we describe the identification of Rhodiola Crenulata from habitat, plant morphology, medicinal properties, microscopic features, and thin-layer chromatography.

Macroscopic and Microscopic Identification of Rhodiola crenulata Traits and Constituents

To begin, observe the appearance traits of Rhodiola Crenulata with the unaided eye and record the observations. Inhale near the plant to identify the fragrance smell. Next, place a small piece of the root in the mouth, then sip and chew for taste identification.Using a brush, remove the soil on the surface of the plant. Place the plant in an oven at 40 degrees Celsius and turn it every 24 hours. Then powder the dried medicinal materials using a powder machine and filter it through a medicated number three sieve.Spread the powder evenly on a clean slide using a dissecting needle covering 1/3 of the slide within a two millimeter area. Using a glass dropper, add a drop of deionized water to the powder and quickly place a cover glass using a tweezer. Next, place the slide onto the microscope platform.Adjust the light source and the coarse focus spiral to view the powder. Switch to a 40X objective lens and observe the starch granules. Again, spread the powder evenly on a slide using a dissecting needle, then add a drop of chloral hydrate to the powder.Hold the slide with a tweezer and heat on the alcohol lamp thrice for one second each. Add a drop of glycerin to the powder and quickly place a cover glass onto the drop. After adjusting the microscope settings as demonstrated previously, select a 40X objective lens to visualize the catheter, cork cells and fibers, along with the wood parenchyma cells and pigment block respectively.Microscopic examination of our Crenulata revealed key features with cork cells appearing brownish yellow, or colorless with polygonal shapes. Starch grains were observed as single or multiples with distinctive umbilical points and closely arranged spiral vessels. Additionally, xylem parenchyma cells were visualized as achromatic and oval, containing calcium oxalate sand crystals, and irregularly shaped brown red pigment blocks were identified.

זיהוי מקרוסקופי ומיקרוסקופי של תכונות ומרכיבים של Rhodiola crenulata

Preparing and Analyzing Thin Layer Chromatography Samples of Rhodiola crenulata and Reference Compounds

To begin, weigh three grams of Rhodiola crenulata powder and transfer it into a 100-milliliter conical bottle. Using a large bowl pipette, add 25 milliliters of methanol into the bottle. Place the bottle in the ultrasonic instrument.Set the power to 250 watts, frequency to 40 kilohertz, time to 30 minutes, and start the ultrasonication. Next, rinse the outside of the bottle under running water until it reaches room temperature. Filter the solution through a 0.22-micron microporus membrane.Using a one-milliliter syringe, aspirate 800 microliters of liquid from the bottle and collect 400 microliters of the midstream solution into a chromatographic sample bottle. Measure and add one milligram of salidroside, 0.5 milligrams of tyrosol, and 0.5 milligrams of gallic acid into three separate one-milliliter volumetric flasks. Then, fill each flask to the scale marked with methanol.Sonicate the samples in the ultrasonic instrument using the conditions described previously. Following ultrasonication, aspirate 800 microliters of liquid from the flask. Filter the solution through a 0.22-micrometer microporous membrane and collect 400 microliters of filtrate into the bottle.Add trichloromethane, ethyl acetate, methanol, and formic acid on one side of the double tank chromatography cylinder. Shake the cylinder to mix the contents evenly and cover the upper cylinder head. Arrange the gallic acid, salidroside, tyrosol standard solutions, and our crenulata solution on the sample rack in positions A1 to A4.Place a 5x10-centimeter silicone sheet on the sampling table.Turn on the automatic sampling machine and open the air control valve. Press the Continue button for automatic sampling. After sampling, turn off the machine and air valve.Remove the silicone sheet from the machine. Put the silicone sheet into the other side of the double tank chromatography cylinder. Cover the upper cylinder head and pre-saturate for 20 minutes.Next, use a tweezer to hold the upper end of the thin layer plate and quickly put the silicone sheet into the development agent. Once the organic solvent evaporates, spray the silicone sheet with chromogenic solution. The thin layer chromatographic analysis showed that the R.crenulata sample appeared in spots of the same color, corresponding to the gallic acid, salidroside, and tyrosol standards.