עבודה זו נתמכה על ידי מחקר בסיסי JST 2022 (האגודה היפנית להשתלות).

פרוטוקול הניסוי אושר על ידי הוועדה לניסויים בבעלי חיים באוניברסיטת קיוטו. במחקר נעשה שימוש בעכברי C57BL/6, בני יותר מ-10 שבועות ובמשקל שבין 25 גרם ל-30 גרם, שהתקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים). כל בעלי החיים הורדמו עם 2.5% איזופלורן (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי מוסדות), נשמרו בתנאים ספציפיים נטולי פתוגנים, וכל הליכי הניסוי נערכו בהתאם לתקנות הניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת קיוטו. המכשירים המתאימים ששימשו למחקר מפורטים בטבלת החומרים ומתוארים באיור 1 ובאיור 2.
1. בחירת בעלי חיים
<ol><li>השתמש עכברים עם משקל גוף של 25-30 גרם. הערה: בעוד שאלושתלי כבד עכבר2 מקובלים בדרך כלל על פני מחסום מורכב של היסטותאימות מרכזית, בחרנו במודל MOLT הסינגני במחקר זה כדי להתמקד במנגנון המפורט של פגיעה בזילוח איסכמיה קרה10. עכברים במשקל של פחות מ -25 גרם אינם מומלצים מכיוון שאי אפשר להחדיר סטנט פנימי לצינור מרה דק. באופן דומה, עכברים במשקל של יותר מ -30 גרם אינם מומלצים בשל נוכחות של כמות גדולה של שומן תוך בטני סביב כלי הדם.</li>
</ol>2. הכנת שרוול
<ol><li>הכינו צנתרים תוך ורידיים של 20 G ו-16 G עבור PV ו-IHIVC, בהתאמה.</li>
	<li>בעזרת אזמל, חותכים את הצנתר ליצירת השרוול. אורך הגוף העיקרי של השרוול צריך להיות 2 מ"מ, עם ידית מאריכה של 1 מ"מ (איור 3A). הערה: אם הידית גדולה מדי, ייתכן שיהיה מאתגר להכניס את השרוול.</li>
	<li>על פני השרוול, צור חריץ רדוד לקיבוע חוטים באמצעות גב להב האזמל. הערה: בעת הנחת גב להב האזמל על השרוול, ודא שקצה הלהב נמצא בזווית של כ-60 מעלות (כפי שמוצג באיור 3B). לאחר ביצוע החריץ הראשון, אבטחו את להב האזמל וסובבו את השרוול. באופן אידיאלי, מומלץ שני חריצים, אך חריץ אחד יכול להספיק ללא בעיות.</li>
</ol>3. חיבור שרוול
<ol><li>במיכל פלסטיק בצורת מלבני, מניחים קוביות קרח קטנות ומניחים מתכת קטנה (בקוטר 6 ס"מ) מעל. מלאו את הכוס בנוזל לשימור איברים (ראו טבלת חומרים) והניחו בתוכה את השתל הסינגני.</li>
	<li>גלגלו בעדינות את שתל הכבד הסינגני (המופק מעכבר תורם אחר) באמצעות צמר גפן, וודאו שהפורטה הפטיס פונה כלפי מעלה. הסר ביסודיות כל דם המאוחסן לומן של IVC עם נוזל שימור איברים.</li>
	<li>השחילו את ה-PV דרך השרוול באמצעות חוט המחובר, למשל, לווריד הטבור (ראו איור 4A).</li>
	<li>כאשר ידית השרוול במצב השעה 12, הדקו את הידית ואת השרוול באמצעות מהדק בולדוג (ראו טבלת חומרים), ומקמו אותו במרחק של 2 עד 3 מ"מ מקצה ה-PV.</li>
	<li>הדקו את מהדק הבולדוג עוד יותר באמצעות מלקחיים וסקולריים גדולים ותבנית קיבוע כדי לבסס את שדה הניתוח (ראו איור 4B).</li>
	<li>בדקו היטב את לומן ה-PV בהגדלה של פי 15 עד פי 20 בקירוב. במידת הצורך, טפטוף מים יכול לשפר את הראות של לומן.</li>
	<li>אחזו בעדינות בלומן ה-PV והחצינו אותו דרך השרוול.</li>
	<li>לאחר החצנה מלאה, אבטחו אותו עם קשירה כפולה באמצעות 8-0 חוט משי לאורך חריץ השרוול (איור 4C,D). הערה: ודא שהליגטורה אינה רופפת. כמו כן, יש לוודא שנקודת הרצועה אינה גדולה מדי, שכן היא עלולה להפריע להחדרת השרוול. ניתן למקם את נקודת החיבור לכל כיוון.</li>
	<li>חברו את השרוול ל-IHIVC באמצעות הליך דומה לזה המשמש ל-PV (איור 4E). הערה: בעת הידוק IHIVC עם השרוול, הימנע מלנגוס בפרנכימת הכבד. מכיוון שהצוואר קצר יותר מה- PV, קבע בזהירות את מיקום ההידוק.</li>
	<li>צור פתק על-ידי העברת החוט סביב בסיס IHIVC כדי לקשור באופן זמני את IHIVC (איור 5). חוט זה יוסר לאחר רפרפוזיה.</li>
</ol>4. שחזור ורידים בפורטל
<ol><li>להרדים את העכבר המושתל על ידי גרימת הרדמה עם איזופלורן ב -2.5% ולהפחית אותו ל -0.6% לפני חילוץ הכבד המקומי כמתואר בספרות שפורסמה2. Dinsinfect את האזור הכירורגי לפחות שלוש פעמים עם סיבובים לסירוגין של יודופור ו 70% אתנול לפני laparotomy.</li>
	<li>ודא כי האונה הכבדית ממוקמת כראוי וכי PV אזוק הוא ללא פיתול פיתול.</li>
	<li>אחזו בעדינות בקצה ה-PV של הנמען באמצעות מלקחיים מסוג Pean ואבטחו אותו באמצעות ויזה. הערה: במאמר זה, ויזה מתייחסת למכשיר מכני המשמש לאבטחת מלקחיים אפונים על השולחן. לקבלת מידע נוסף על vise, ראה טבלת חומרים.</li>
	<li>החל מהדק כלי דם על PV של הנמען ולהעביר 8-0 חוט משי סביבו.</li>
	<li>צור חתך היקפי של 1/4 במרחק של כ-0.5 מ"מ מקצה ה-PV (איור 6A). הגדילו את החור תוך העברת תמיסת מלח דרך הלומן באמצעות מכשיר מיוחד (מחט 27 גרם עם קצה חתוך וכפוף לצורת L).</li>
	<li>השתמש במלקחיים ישרים כדי לאחוז בידית השרוול ולהכניס אותה לתוך הלומן.</li>
	<li>לאחר החדרתו המלאה, הדקו את השרוול עם 8-0 חוט משי. קשירה אחת מספיקה לקיבוע.</li>
	<li>הסר את מהדק כלי הדם ו reperfuse את הכבד.</li>
	<li>שחררו בזהירות את מלקחיים האפונה והשלימו את שחזור ורידים פורטליים. כל תהליך השחזור של PV אמור להימשך כ-5 דקות.</li>
</ol>5. שחזור וריד נבוב נחות אינפרא-הפטי
<ol><li>מקמו את אונת הכבד כראוי והזיזו את מלקחיים האפונים המחוברים לגבי המושתל לאונה התחתונה הימנית של השתל, תוך אבטחתה באמצעות ויזה.</li>
	<li>סלקו את כל רקמת הכבד שנותרה סביב IVIHC של הנמען על ידי שפשוף עדין עם צמר גפן.</li>
	<li>פס"ד 8-0 חוט משי סביב IVIHC של הנמען.</li>
	<li>צור חתך היקפי של 1/4 במרחק של כ-0.5 מ"מ מקצה IVIHC של הנמען (איור 6B).</li>
	<li>לאחר החדרת תמיסת מלח רגילה ללומן, הכנס את השרוול ללומן. הערה: בשל הצוואר הקצר, השרוול מוכנס לעתים קרובות בצורה רדודה יותר מאשר PV.</li>
	<li>אבטחו בזהירות את השרוול עם 8-0 חוט משי ולאחר מכן להסיר את מהדק כלי הדם ואת מלקחיים אפונה.</li>
</ol>6. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>השתמש בכרית חימום ומנורת חימום כדי להקל על ההתאוששות לאחר הניתוח.</li>
	<li>ניטור רציף של לחץ הדם, קצב הלב, קצב הנשימה, טמפרטורת הגוף, כמו גם צריכת מזון ומים.</li>
	<li>הזרקה תת עורית של קרפרופן (5 מ"ג/ק"ג, כל 6 שעות או עד הצורך) להקלה על כאבים לאחר הניתוח. פעל בהתאם להנחיות המוסדיות המקומיות. הערה: אם מצבם של עכברים מתדרדר, הניסוי יופסק מיד ועכברים הומתו על ידי שאיפת פחמן דו חמצני.</li>
	<li>כדי לאסוף את דגימת הרקמה, הרדימו מחדש את העכברים והרדימו אותם בשיטה שאושרה על ידי IACUC.</li>
</ol>

אסטרטגיות לאנסטומוזה וסקולרית יעילה בהשתלת כבד עכבר

<ol>
	<li>Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+the+mouse.">Orthotopic liver transplantation in the mouse.</a> Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).</li><li>Yokota, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+mouse+liver+transplantation+to+study+liver+biology+and+allograft+tolerance.">Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance.</a> Nat Protoc. 11 (7), 1163-1174 (2016).</li><li>Shen, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+responses+in+a+new+mouse+model+of+prolonged+hepatic+cold+ischemia+followed+by+arterialized+orthotopic+liver+transplantation.">Inflammatory responses in a new mouse model of prolonged hepatic cold ischemia followed by arterialized orthotopic liver transplantation.</a> Liver Transpl. 11 (10), 1273-1281 (2005).</li><li>Kageyama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+in+allogeneic+liver+transplantation:+A+role+of+CD4+T+cells+in+early+allograft+injury.">Ischemia-reperfusion injury in allogeneic liver transplantation: A role of CD4 T cells in early allograft injury.</a> Transplantation. 105 (9), 1989-1997 (2021).</li><li>Li, T., Hu, Z., Wang, L., Lv, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Details+determining+the+success+in+establishing+a+mouse+orthotopic+liver+transplantation+model.">Details determining the success in establishing a mouse orthotopic liver transplantation model.</a> World J Gastroenterol. 26 (27), 3889-3898 (2020).</li><li>Tian, Y., R&#252;diger, H. A., Jochum, W., Clavien, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+arterialized+and+nonarterialized+orthotopic+liver+transplantation+in+mice:+Prowess+or+relevant+model.">Comparison of arterialized and nonarterialized orthotopic liver transplantation in mice: Prowess or relevant model.</a> Transplantation. 74 (9), 1242-1246 (2002).</li><li>Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+hepatic+rearterialization+on+reperfusion+injury+and+outcome+after+mouse+liver+transplantation.">Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation.</a> Transplantation. 76 (2), 327-332 (2003).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+various+techniques+of+mouse+liver+transplantation.">A review of various techniques of mouse liver transplantation.</a> Transplant Proc. 45 (6), 2517-2521 (2013).</li><li>Kojima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+carcinoembryonic+antigen-related+cell+adhesion+molecule+1-T+cell+immunoglobulin+domain+and+mucin+domain-containing+protein+3+cross+talk+alleviates+liver+transplant+injury+in+mice+and+humans.">T cell carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1-T cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 3 cross talk alleviates liver transplant injury in mice and humans.</a> Gastroenterology. 165 (5), 1233-1248 (2023).</li><li>Yokota, S., Yoshida, O., Ono, Y., Geller, D. A., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+transplantation+in+the+mouse:+Insights+into+liver+immunobiology,+tissue+injury,+and+allograft+tolerance.">Liver transplantation in the mouse: Insights into liver immunobiology, tissue injury, and allograft tolerance.</a> Liver Transpl. 22 (4), 536-546 (2016).</li></ol>

לאף מחבר אין ניגודי עניינים לחשוף.

לימוד שחזור כלי דם הוא ההיבט המאתגר ביותר בהשגת MOLT מוצלח. איכות השרוול משפיעה באופן משמעותי על קושי השחזור, בהתחשב בגודל הקטן של עכברים5. מאמר זה מספק פרוטוקול מפורט להכנת השרוול, חיבורו ושחזורו.
אמנם אין הבדלים משמעותיים מדיווחים קודמים לגבי הכנת השרוול וחיבור...

השתלת כבד אורתוטופית בעכבר (MOLT) היא שיטה ניסיונית יעילה שדווחה לראשונה בשנת 19911. מודל ניסיוני זה, המשתמש בעכברים מהונדסים גנטית וריאגנטים מחקריים שונים, מילא תפקיד מרכזי בחקירת איסכמיה חמה וקרה ופציעות רפרפוזיה. עם זאת, המורכבות הטכנית הגבוהה של המודל עיכבה את פיתוח הרפואה הבסיסית להשתלת כבד2. MOLT כולל שלושה שלבים עיקריים: (1) שליפת הכבד מהעכבר התורם, (2) ניתוח שולחן אחורי, ו-(3) השתלת הכבד במקבל. מבין ההליכים המושתלים הללו, אנסטומוזה וסקולרית מהווה את האתגר הגדול ביותר. בעוד שהאנסטומוזה של הווריד הנבוב התחתון העל-כבד מסתיימת בדרך כלל על ידי תפירה ידנית2, ניתן לשחזר את הווריד הנבוב התחתון האינפרא-הפטי (IHIVC) ואת הווריד הפורטלי (PV) בצורה יעילה יותר באמצעות אזיקי פלסטיק במקום תפרים שנתפרו ביד.
תקופת הכבד מסמלת את המרווח בין הסרת הכבד המקומי של המקבל לבין השתלת השתל. כדי להבטיח תוצאות עקביות, זה הכרחי להגביל את הזמן anhepatic לפחות מ 20 דקות. כתוצאה מכך, מחקרים המשתמשים במודל זה הוגבלו למוסדות ספציפיים 3,4,5,6,7,8,9. בין השלבים השונים של MOLT, השגת שחזור PV ו- IHIVC חלק הוא חיוני למזעור זמן ההדבק ולהבטחת השתלה מוצלחת.
שחזור PV ו- IVC מתבצע בדרך כלל באמצעות אזיקי כלי דם מכיוון שטכניקת השרוול מפשטת אנסטומוזה וסקולרית בהשוואה לתפרים תפורים ביד 2,5,8. הטכניקה הכרוכה בהכנת שרוול כלי הדם וחיבור בטוח של השרוול משפיעה באופן משמעותי על מורכבות שחזור כלי הדם של הנמען. מטרתנו היא לספק הדרכה ויזואלית מפורטת לטיפים טכניים רבים הקשורים לשיטת השרוול, ובכך להפחית את עקומת הלמידה. קטעי וידאו אלה יספקו הבנה ברורה כיצד לחבר את השרוול לכלי הדם ולשחזר את PV ו- IHIVC במהלך ניתוח מושתל.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>16 G intravenous catheter</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SR-FF2032</td>
			<td>IHIVC cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 G intravenous catheter</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SR-FF1651</td>
			<td>PV cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 braid silk</td>
			<td>Natsume Seisakusho</td>
			<td>CR9-80B2</td>
			<td>8-0 silk</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Belzer UW Cold Storage Solution&#160;</td>
			<td>Astellas</td>
			<td></td>
			<td>Organ preservation fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp</td>
			<td>B BRAUN</td>
			<td>FB329R</td>
			<td>Bulldog clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice&#160;&#160;</td>
			<td>Oriental Bio Service</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane inhalation solution</td>
			<td>Viatris</td>
			<td></td>
			<td>Anesthesic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Blunted Tips 0.1 mm x 0.06 mm&#160;</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11253-20</td>
			<td>Straight microforceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine Clamp Applicator with Lock</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>18056-14</td>
			<td>Vessel clip applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefines&#160;</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>18055-4</td>
			<td>Vessel clip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No.11 Spare Blades</td>
			<td>FEATHER Safety Razor</td>
			<td>11</td>
			<td>Blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic scissor, round handle</td>
			<td>B BRAUN</td>
			<td>FD103R</td>
			<td>Microscissor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic rectangular-shaped container&#160;&#160;</td>
			<td>Daiso</td>
			<td></td>
			<td>10 cm long, 15 cm wide and 6 cm high</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperGrip Tips</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>00649-11&#160;</td>
			<td>Curved microforceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SZX7</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX7</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

vascular reconstruction with the cuff technique in mouse orthotopic liver transplantation

השתלת כבד אורתוטופית בעכבר היא מתודולוגיה יעילה לחקר המנגנונים הבסיסיים של איסכמיה בכבד ופגיעה ברפרפוזיה. עם זאת, האתגרים הטכניים מציבים מחסום לשימוש במודל ניסיוני יקר ערך זה ולהעברת מיומנויות אלה לדור הבא. ההיבט המאתגר ביותר של הליך זה הוא שחזור כלי דם, כולל וריד הפורטל (PV), וריד נבוב נחות אינפרא-הפטי (IHIVC), ווריד נבוב נחות על-הכבד. השימוש באזיקים מפלסטיק, במקום בתפרים, מאפשר שחזור PV ו-IHIVC חלק יותר. כלי הדם משוחזרים על ידי הצמדת שרוול העשוי מצנתר תוך ורידי לקצה כלי ההשתלה והחדרת השרוול לכלי המקבל. שני ההיבטים המכריעים ביותר הם לדמיין כראוי את לומן הפנימי של הכלי והימנעות משימוש בכוח מוגזם. מטרתנו היא לספק סקירה טכנית של שחזורי כלי דם באמצעות טכניקת השרוול בניתוח מושתל. טיפים טכניים אלה לטכניקת השרוול צפויים לסייע למיקרוכירורגים להקל על שחזור כלי הדם ולקדם את מחקרם.

Mouse orthotopic liver transplantation (MOLT) is an effective experimental method first reported in 19911. This experimental model, which utilizes genetically modified mice and various research reagents, has played a pivotal role in investigating warm and cold ischemia and reperfusion injuries. However, the model&#39;s high technical complexity has hindered the development of basic medicine for liver transplantation2. MOLT involves three major steps: (1) retrieval of the liver from the donor mouse, (2) back table surgery, and (3) implantation of the liver into the recipient. Among these recipient procedures, vascular anastomosis poses the greatest challenge. While the suprahepatic inferior vena cava anastomosis is typically completed by hand stitching2, the infrahepatic inferior vena cava (IHIVC) and portal vein (PV) can be reconstructed more efficiently using plastic cuffs in place of hand-sewn sutures.
The anhepatic period signifies the interval between the removal of the recipient&#39;s native liver and the graft implantation. To ensure consistent results, it is imperative to limit the anhepatic time to less than 20 min. Consequently, studies employing this model have been confined to specific institutions3,4,5,6,7,8,9. Among the various stages of MOLT, achieving smooth PV and IHIVC reconstruction is crucial for minimizing anhepatic time and ensuring successful transplantation.
PV and IVC reconstruction is generally carried out using vascular cuffs since the cuff technique simplifies vascular anastomosis compared to hand-sewn sutures2,5,8. The technique involved in vascular cuff preparation and secure attachment of the cuff significantly impacts the complexity of recipient vascular reconstruction. Our objective is to provide detailed visual guidance for numerous technical tips related to the cuff method, thereby reducing the learning curve. These video clips will provide a clear understanding of how to attach the cuff to the vessels and reconstruct the PV and IHIVC during recipient surgery.

מחבר זרקור: חקר איסכמיה קרה ופגיעה ברפרפוזיה חמה בהשתלת כבד שומני

שחזור כלי דם בטכניקת השרוול בהשתלת כבד אורתוטופית בעכבר

We focus our research on liver transplantation, in particular on cold ischemia and warm reperfusion injury. We use mouse liver transplantation model as a research tool for this purpose. Because the technique is difficult, so it can take a long time to learn and to achieve consistent results.In the future, we'd like to conduct research on fatty liver transplantation. This is still a problem to overcome on clinical liver transplantation.

שחזור PV מוצלח כאשר, עם פתיחת הידוק הווריד הפורטלי, אין פיתול, והכבד מחורר באופן אחיד. זמן הכבד צריך להיות מתחת ל -20 דקות, מכיוון שזמני הכבד העולים על 25 דקות מגבירים את הסיכון לתמותת עכברים. שחזור IHIVC נחשב מוצלח אם אין פליטת דם מהשתל.
אחסון השתל בטמפרטורות קרות למשך שעה אחת באמצע...

Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Exploring Cold Ischemia and Warm Reperfusion Injury in Fatty Liver Transplantation at JoVE.com

פרוטוקול זה מספק מידע טכני לשחזור כלי דם באמצעות טכניקת השרוול בהשתלת כבד אורתוטופית בעכבר.

Mouse orthotopic liver transplantation is an effective methodology for investigating the underlying mechanisms of liver ischemia and reperfusion injury. ...

אנו ממקדים את המחקר שלנו בהשתלות כבד, במיוחד באיסכמיה קרה ובפגיעה ברפרפוזיה חמה. אנו משתמשים במודל השתלת כבד עכבר ככלי מחקרי למטרה זו. כי הטכניקה קשה, אז זה יכול לקחת הרבה זמן ללמוד ולהשיג תוצאות עקביות.בעתיד נרצה לערוך מחקר על השתלת כבד שומני. זו עדיין בעיה להתגבר עליה בהשתלת כבד קלינית.

vascular-reconstruction-with-cuff-technique-mouse-orthotopic-liver

Research

JoVE Journal

Medicine

Vascular Reconstruction with the Cuff Technique in Mouse Orthotopic Liver Transplantation

844 Views.  Kyoto University. אנו ממקדים את המחקר שלנו בהשתלות כבד, במיוחד באיסכמיה קרה ובפגיעה ברפרפוזיה חמה. אנו משתמשים במודל השתלת כבד עכבר ככלי מחקרי למטרה זו. כי הטכניקה קשה, אז זה יכול לקחת הרבה זמן ללמוד ולהשיג תוצאות עקביות.בעתיד נרצה לערוך מחקר על השתלת כבד שומני. זו עדיין בעיה להתגבר עליה ב...

Video: מחבר זרקור: חקר איסכמיה קרה ופגיעה ברפרפוזיה חמה בהשתלת כבד שומני

Mouse orthotopic liver transplantation is an effective methodology for investigating the underlying mechanisms of liver ischemia and reperfusion injury. However, the technical challenges pose a barrier to utilizing this valuable experimental model and passing on these skills to the next generation. The most challenging aspect of this procedure is vascular reconstruction, including the portal vein (PV), infrahepatic inferior vena cava (IHIVC), and suprahepatic inferior vena cava. The use of plastic cuffs, rather than sutures, allows for smoother PV and IHIVC reconstruction. Vessels are reconstructed by attaching a cuff made from an intravenous catheter to the tip of the graft vessel and interposing the cuff into the recipient vessel. The two most crucial aspects are properly visualizing the inner lumen of the vessel and avoiding the use of excessive force. Our aim is to provide a technical overview of vascular reconstructions using the cuff technique in recipient surgery. These technical tips for the cuff technique are expected to help microsurgeons facilitate vascular reconstruction and advance their research.

This protocol provides technical information for vessel reconstruction using the cuff technique in mouse orthotopic liver transplantation.

Preparation and Attachment of Vascular Cuffs for Syngeneic Liver Grafting

To begin, prepare 16-gauge and 20-gauge intravenous catheters for the portal vein, or PV, and the infra hepatic inferior vena cava, or IHIVC, respectively. Using a scalpel, cut the catheter to create the cuff. Then with the back of the scalpel, create a shallow groove on the cuff's surface for thread fixation.Place small ice cubes in a rectangular-shaped plastic container, and position a small metal cup on top of the container. Fill the cup with organ preservation fluid and place the syngeneic liver graft in it. Under eight to 10 X magnification, gently roll the liver graft using a cotton swab, ensuring that the porta hepatis faces upwards.Thread the PV through the cuff, using a thread attached to the splenic vein. With the cuff handle at the 12:00 position, secure the handle and cuff with a bulldog clamp, positioning it two to three millimeters from the PV edge. Further secure the bulldog clamp using large vascular forceps and a fixation mold to establish the operative field.Next, increase the magnification to 15 to 20 X and carefully inspect the PV lumen. After grasping the PV lumen, externalize the thin wall of PV through the inner lumen of the cuff. Secure the fully externalized PV lumen with a double ligation using 8-O silk thread along the cuff's groove, and then cut the string.Similarly, attach the cuff to the IHIVC lumen, and fix it using 8-O silk thread. Then, to create a slipknot, pass the thread around the base of the IHIVC to temporarily ligate it.

הכנה וחיבור של אזיקי כלי דם להשתלת כבד סינגנית

Portal Vein and Infrahepatic Inferior Vena Cava Reconstruction in Mouse Liver Transplantation

After extracting the native liver from the anesthetized recipient mouse, gently grasp the recipient's liver portal vein or PV edge using pen forceps and secure it with a vice. Pass an eight oh silk thread around the PV and place a vascular clamp on it. Create a one fourth circumferential section approximately 0.5 millimeters from the PV edge.While passing saline through the hole, use a specialized instrument to enlarge the hole. Grip the cuff handle using straight forceps and insert it into the lumen. Then secure the cuff with an 8.0 silk thread.Remove the vascular clamp from PV to allow reperfusion of the liver. Finally, carefully release the pen forceps to complete the PV reconstruction. After positioning the liver lobe, Move the pen forceps attached to the recipient IHIVC dorsal to the graft's right lower lobe.Then secure the IHIVC with a vice. Rub away any remaining liver tissue around the recipient's IHIVC with a cotton swab. Pass an 8.0 silk thread around the recipient's IHIVC.Create a one fourth circumferential section, approximately 0.5 millimeters from the recipient's IHIVC edge. After flushing the lumen with saline, insert the cuff into the IHIVC lumen. Carefully secure the cuff with an 8.0 silk thread.Finally, remove the vascular clamp and pen forceps. The preservation of the graft at cold temperatures for one hour resulted in serum alanine aminotransferase levels, averaging approximately 2000 units per liter at six hours post reperfusion. A survival rate of 100%was observed at seven days following transplantation.