Modifica dei livelli di acido folico o colina nella dieta materna per studiare l'impatto delle carenze sugli esiti di salute della prole

Riepilogo

Questo protocollo descrive il metodo per ridurre l'assunzione alimentare di acido folico o colina nei topi femmina prima della gravidanza con l'obiettivo di studiare l'impatto della dieta materna sui risultati di salute della prole.

Abstract

La nutrizione materna durante la gravidanza e l'allattamento svolge un ruolo importante nel neurosviluppo della prole. Il metabolismo a un carbonio (1C), che si concentra sull'acido folico e sulla colina, così come su altre vitamine del gruppo B, svolge un ruolo chiave durante la chiusura del tubo neurale del feto in via di sviluppo. Tuttavia, l'impatto di queste carenze nutrizionali materne durante la gravidanza sugli esiti di salute della prole dopo la nascita rimane relativamente indefinito. Inoltre, le carenze alimentari materne di acido folico o colina possono influire su altri risultati di salute nella prole, rendendolo un modello prezioso. Questo protocollo ha lo scopo di delineare la procedura per indurre un deficit nel metabolismo dell'1C nei topi femmina attraverso modifiche della dieta. Le femmine vengono messe a dieta allo svezzamento, fino a 2 mesi di età, per 4-6 settimane prima dell'accoppiamento e rimangono a dieta durante la gravidanza e l'allattamento. La prole di queste femmine può essere valutata per gli esiti di salute. Le femmine possono essere utilizzate più volte per generare prole e i tessuti delle femmine possono essere raccolti per misurare le misurazioni dei metaboliti 1C. Questo protocollo fornisce una panoramica su come indurre carenze alimentari materne di acido folico o colina per studiare i risultati di salute della prole.

Introduzione

La nutrizione materna durante la gravidanza e l'allattamento svolge un ruolo fondamentale nello sviluppo della prole. Il metabolismo a un carbonio (1C) è una rete metabolica chiave che integra i segnali nutrizionali con la biosintesi, l'omeostasi redox e l'epigenetica. L'acido folico e la colina sono componenti centrali dell'1C che svolgono un ruolo importante nella chiusura del tubo neurale. È ampiamente raccomandato per le donne integrare con acido folico e colina durante l'età fertile¹. Mentre il ruolo critico dell'acido folico nello sviluppo fetale è chiaramente stabilito, i meccanismi sottostanti coinvolti rimangono poco chiari. Si raccoma....

Protocollo

Questo protocollo è stato approvato e tutti i soggetti animali sono stati utilizzati in conformità con le linee guida del Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali della Midwestern University (Protocollo 2983). In questo studio sono stati utilizzati topi femmina C57BL/6J, di 2 mesi di età (peso corporeo, ~20 g). In generale, possono essere utilizzati topi femmine in età riproduttiva¹⁰. Per evitare gli effetti della cucciolata, è necessario utilizzare più femmine per ogni dieta¹¹. I dettagli dei reagenti e delle attrezzature utilizzate nello studio sono elencati nella tabella dei materiali.....

Discussione

Durante l'implementazione di questo protocollo nei laboratori di ricerca, ci sono diverse note importanti che i ricercatori devono considerare prima di iniziare gli esperimenti. In primo luogo, nella produzione di diete, è necessario disporre di un tempo sufficiente per produrre la dieta prima dell'inizio dello studio sperimentale. I tempi di consegna possono variare da azienda ad azienda e anche la spedizione della dieta deve essere presa in considerazione. I topi femmina che sono in età riproduttiva (~2-2,5 mesi di e.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL tubes	Eppendorf
C57BL/6 Female Mice	Charles River	27	Mice can be bred in house as well.
Choline Deficient Diet	Envigo	TD.06119
Control Diet	Envigo	TD.190790
EDTA tubes
Folic Acid Deficient Diet	Envigo	TD.01546
GraphPad prism			https://www.graphpad.com/features
Housing for rodents	Lab Products, LLC	One CageVentilated Racks & Cages
Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)	SCIEX, Framingham, MA	5500 QTrap
Ultra-performance liquid chromatography (UPLC)	Shimadzu, Columbia, MD, USA	Nexera