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Qui viene mostrata una procedura chirurgica minimamente invasiva, che prevede il posizionamento della sonda laser Doppler sul cranio sopra la regione distale dell'arteria cerebrale media (MCA), una posizione periorbitale adatta a ratti e topi, per valutare il flusso sanguigno durante l'occlusione transitoria MCA.
L'occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) è il metodo gold standard per la modellazione preclinica dell'ictus ischemico nei roditori. Tuttavia, il successo dell'occlusione non è garantito nemmeno dalle mani chirurgiche più esperte. Gli errori si verificano principalmente quando il filamento non è posizionato alla profondità corretta e includono casi di assenza di infarto o perforazione del vaso, che possono causare la morte. La flussimetria laser Doppler (LDF) è una tecnica affidabile che fornisce un feedback in tempo reale sul flusso sanguigno cerebrale regionale (CBF) durante la procedura MCAO. Qui dimostriamo una tecnica rapida per il posizionamento periorbitale di una sonda laser Doppler per la misurazione del CBF sia nei topi che nei ratti. La nostra logica era quella di semplificare l'implementazione di LDF, incoraggiando un uso diffuso per una migliore affidabilità chirurgica. La tecnica elimina la necessità di assottigliare il cranio e di attrezzature specializzate, con il posizionamento nella regione periorbitale piuttosto che nel posizionamento dorsale, promuovendo l'efficienza e la facilità di adozione. Il protocollo qui descritto comprende le preparazioni prechirurgiche, il posizionamento della sonda Doppler periorbitale e l'assistenza post-operatoria. I risultati rappresentativi includono rappresentazioni visive di elementi procedurali insieme a tracciati LDF rappresentativi che illustrano interventi chirurgici MCAO di successo, con casi di posizionamento non riuscito del filamento che hanno portato a complicanze. Il protocollo illustra l'LDF nel confermare il corretto posizionamento del filamento e offre una procedura semplificata rispetto ai metodi alternativi.
Il metodo dell'occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) è stato ampiamente utilizzato nei roditori da quando è stato introdotto nella comunità scientifica per l'applicazione ai ratti nel 19861 con l'adattamento Longa descritto nel 19902 e gli adattamenti per i topi subito dopo3. Sebbene non descritto nella pubblicazione di Longa, l'uso del segnale di flussimetria laser Doppler (LDF) per confermare il posizionamento del filamento è stato presto descritto in letteratura4. L'impiego di LDF durante la procedura MCAO è presente in modo pro....
Per illustrare questo protocollo sono stati utilizzati topi e ratti adulti (25 g, C57BL/6J, Jackson Laboratories; 250 g, Sprague Dawley, Envigo). Le procedure di manipolazione e sperimentazione degli animali sono state eseguite con l'approvazione e in conformità con il Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università dell'Arizona, le leggi nazionali e secondo i principi della cura degli animali da laboratorio11. Ratti e topi sono stati alloggiati con un programma di 12 ore di luce/buio (7-19) con cibo e acqua disponibili ad libitum.
1. Preparazi....
Il posizionamento della sonda laser Doppler nella regione MCA è illustrato visivamente nella Figura 1, offrendo un pittogramma della vascolarizzazione e fungendo da guida visiva dalle prospettive sagittale e dorsale. La Figura 2 riassume i passaggi critici per il posizionamento della sonda laser Doppler e i risultati nel topo. La Figura 2A presenta l'immagine di un topo anestetizzato e preparato co.......
La MCAO è la procedura gold standard per modellare l'occlusione e la riperfusione dell'arteria cerebrale nei roditori ed è stata la pietra angolare della ricerca preclinica sull'ictus, consentendo l'induzione dell'ischemia focale nei roditori per imitare la fisiopatologia dell'ictus umano. Si tratta di una procedura chirurgica impegnativa con una significativa variabilità inter- e anche intra-chirurgo. Sebbene non ci siano prove che l'applicazione di LDF riduca la variabilità, in alc.......
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Questa ricerca è stata finanziata da NINDS 1R41NS124450. Biorender: KT26JWLYF6
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
curved spring scissors | Castroviejo | 1501710 | |
forceps #5 | Fine science tools | 11250-20 | |
forceps #5/45 | Fine science tools | 1151-35 | |
Forcepts Cautery tool | Conmed | M18019-01 | |
Laboratory tape | Fisherbrand Labeling Tape | 15-950 | |
Laser Doppler Monitor | Moore Instruments | MOORVMS-LDF | |
LDF software | Perisoft for Windows or moorSOFT | NA | |
Mouse clippers | Philips Norelco | MG7910 | |
Periflux System 4000, probe 407 | Perimed | equipment no longer available | |
plastic wrap | Glad | press n seal | |
Rat clippers | oster | A5 or similar | |
Small rodent anesthesia | JD Medical | custom order | |
small scissors | excelta | 362 Sissors or similar | |
Temperature monitor system with probe | Physitemp | TCAT-2AC Controller |
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