Per iniziare, schiacciare i materiali medicinali Pheretima, Periplaneta americana e Hirudo con un macinino a base di erbe. Setacciare la polvere medicinale attraverso setacci standard di droga di numero due e numero quattro. Raccogliere la polvere tra i due setacci per ottenere la polvere campione richiesta.
Prendi un grammo di polvere in un tubo di centrifuga di plastica da 50 millilitri. Aggiungere 20 millilitri di soluzione di acido tricloroacetico al 5% e omogeneizzare a 1.000 giri / min per un minuto con un omogeneizzatore a dispersione ad alta velocità. Dopo l'omogeneizzazione, centrifugare l'omogenato a 1.717 G per cinque minuti a temperatura ambiente e filtrare il surnatante attraverso un imbuto di vetro assorbente immerso in cotone in un matraccio tarato da 50 millilitri.
Dopo aver ripetuto il processo di estrazione due volte con 15 e 10 millilitri di soluzione di acido tricloroacetico al 5%, unire i filtrati e portare il volume a 50 millilitri con soluzione di acido tricloroacetico al 5%. Quindi, aggiungere accuratamente due millilitri di soluzione di idrossido di sodio e 0,5 grammi di paraffina solida in flaconcini di spazio di testa da 20 millilitri. Quindi metterli in forno a 70 gradi Celsius per circa 30 minuti.
Estrarre le fiale e lasciarle raffreddare a temperatura ambiente in modo che la paraffina si solidifichi. Per elaborare lo spazio di testa del campione, aggiungere due millilitri di ciascuna soluzione di estrazione del campione ai flaconcini contenenti paraffina solidificata. Premere il tappo e sigillare il flaconcino.
Posizionare le fiale sigillate dello spazio di testa sul GCMS per la misurazione. Per ottenere la curva standard, aspirare una serie di due millilitri di soluzione standard di trimetilammina sopra lo strato di paraffina solidificata. Posizionare i flaconcini sigillati dello spazio di testa sulla macchina per la misurazione della trimetilammina.
Per eseguire il test di precisione, aspirare due millilitri di 0,1 microgrammi per millilitro di soluzione standard di trimetilammina sopra lo strato di paraffina solidificata. Eseguire sei test paralleli nella macchina seguendo le istruzioni del produttore. Per l'esperimento del tasso di recupero, cuocere diversi lotti della polvere del campione in un forno fino a quando non viene rilevata trietilammina in GCMS come dimostrato in precedenza.
Quindi, prendere ogni grammo di polvere cotta e finebile in tubi di centrifuga di plastica da 50 millilitri separati. Aggiungere 50 microlitri di soluzione standard di trimetilammina a tutti i tubi ed estrarre con soluzione di acido tricloroacetico al 5% come dimostrato in precedenza. Il tempo di ritenzione della trimetilammina è risultato essere di 2,3 minuti con un picco acuto e nessuna interferenza da altre impurità.
I campioni di Pheretima, Periplaneta americana e Hirudo sottoposti a test di recupero a spillo mediante essiccazione per ridurre la trietilammina nelle erbe hanno mostrato tassi di recupero medi rispettivamente di 84,49, 94,66 e 85,67%. La trietilammina è stata rilevata in nove lotti di erbe con concentrazioni comprese tra 13,23 e 271,63 milligrammi per chilogrammo.
