Immunofluorescent Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Inizia lavando le cellule staminali di derivazione adiposa murina in una piastra a sei pozzetti con due millilitri di tampone di lavaggio. Aggiungere un millilitro di reagente bloccante dopo aver incubato e lavato le cellule tre volte. Incubare le cellule con agitazione lenta per 20 minuti.

Aggiungere 200 microlitri di anticorpi primari a ciascun pozzetto e incubare durante la notte a quattro gradi Celsius. Dopo aver lavato le piastre tre volte come dimostrato in precedenza, incubare con 200 microlitri di anticorpi secondari. Controcolorare i nuclei cellulari con 100 microlitri di DRAQ7 per 20 minuti dopo aver lavato le piastre tre volte.

Ripetere il lavaggio e montare i vetrini. Visualizza i vetrini montati al microscopio confocale a epifluorescenza. Le cellule staminali derivate dall'adiposio sono risultate positive al 100% per i marcatori di superficie CD9 in tutti i sottopassaggi testati.

Tutte le cellule hanno espresso marcatori CD63 nei sottopassaggi uno, tre e nove, mentre il 49,3% delle cellule lo ha espresso nel passaggio sette. I marcatori CD34 erano assenti nei passaggi uno, sette e nove, ma visibili nel passaggio tre.