Per questo studio, utilizzare piccole cavallette marroni o SBPH allevati in piantine di riso. Una volta che le colture sono pronte, mettere gli SBPH coltivati in un tubo da centrifuga e metterli in un bagno di ghiaccio per 10-30 minuti. Quindi posizionare un SBPH congelato su un vetrino sotto un microscopio stereo con l'addome rivolto verso l'alto e regolare la messa a fuoco sulle sue sei gambe.
Preparare due pinzette ad alta precisione con punte ultra sottili. Usando una pinzetta, premere sul corpo dell'insetto per tenerlo in posizione e tirare con attenzione una gamba con l'altra pinzetta. Quindi premere delicatamente il petto dell'insetto, permettendo all'emolinfa di fluire attraverso la ferita.
Per raccogliere l'emolinfa, preparare una micropipetta posizionando un tubo capillare da microlitro nel bulbo del pipet. Posizionare il tubo capillare vicino alla ferita dell'insetto, tenendo il bulbo della pipetta a micropipetta. Tocca la punta capillare dell'emolinfa essudante e raccoglila.
Una volta che il tubo capillare raggiunge la linea di calcare desiderata, bloccare leggermente il piccolo foro sul bulbo della pipetta con il dito per interrompere il processo di assorbimento. Quindi scaricare l'emolinfa raccolta in 100 microlitri di tampone PBS. L'accuratezza della raccolta dell'emolinfa è stata confermata tramite SDS-PAGE, che ha mostrato un contenuto proteico simile in tutti e tre i campioni di emolinfa, raccolti separatamente.
Per la larva, la concentrazione proteica totale era di circa 3,7 milligrammi per millilitro. Nelle SBPH adulte femminili e maschili, le concentrazioni proteiche erano rispettivamente di circa 3,5 e 3,6 milligrammi per millilitro, senza mostrare differenze significative tra i tre campioni. L'emolinfa larvale ha mostrato emociti di dimensioni da due a 20 nanometri.
Inoltre, la concentrazione cellulare era comparabile nei tre campioni di emolinfa raccolti.
