Lysis and Digestion of Scarce Cells

Per iniziare, prendi un'aliquota di cellule scarse congelate e aggiungi 1 millilitro di tampone di lisi fredda per interrompere la membrana cellulare. Incubare le cellule sul ghiaccio per 30 minuti, mescolando per inversione ogni cinque minuti. Centrifugare i nuclei per 10 minuti a 1.000 G.Rimuovere il surnatante e risospendere i nuclei in 500 microlitri di tampone di restrizione freddo 1,25X 2.

Quindi aggiungere 5,5 microlitri di sodio dodecilsolfato al 10%, mescolare a vortice e incubare in un blocco termico. Quindi spegnere l'SDS aggiungendo 37,5 microlitri di Triton X-100 al 10%. Mescolare e incubare il campione come dimostrato in precedenza.

Aggiungere 7,5 microlitri di Hind III per digerire la cromatina mescolare la soluzione e incubare durante la notte a 37 gradi Celsius.