Ligation and Decrosslinking of Scarce Cell DNA

Per iniziare, prendi il DNA della cellula scarsa digerita e mettilo sul ghiaccio. Preparare una miscela master utilizzando i reagenti necessari per riempire e biotinilare le sporgenze del frammento di restrizione. Incubare il campione a 37 gradi Celsius per 75 minuti, mescolando per inversione ogni 15 minuti.

Raffreddare il campione sul ghiaccio e ligare le estremità del DNA riempito preparando una miscela master utilizzando i reagenti necessari per la legatura. Infine, incubare il campione per quattro-sei ore a 16 gradi Celsius e poi per 30 minuti a temperatura ambiente. Aggiungere 30 microlitri di 10 milligrammi per millilitro di proteinasi K per decrosslinkare la cromatina.

Mescolare la soluzione e incubare durante la notte a 65 gradi Celsius.