Per colorare la membrana della vescicola, aggiungere il colorante lipidico fluorescente FM4-64 alle vescicole purificate ad una concentrazione finale di due micromolari e incubare per 10 minuti prima dell'imaging. Dopo aver isolato le vescicole piene di proteine dalla coltura di Escherichia coli, pipettare le vescicole purificate su un cuscinetto di agarosio circolare 2% LB sottile meno di un millimetro che è stato lasciato formare e impostare su un vetrino pulito. Una volta che il liquido si è asciugato, posizionare una scivolata di copertura di 50 millimetri per 25 millimetri sopra le vescicole sul pad.
Tenere la copertina in posizione con distanziatori e nastro adesivo. Quindi montare il vetrino su un microscopio invertito usando un obiettivo ad immersione in olio e lasciare il campione per due o tre minuti per depositarsi e la temperatura equilibrarsi. Per le immagini a fotogramma singolo, usate la media di tre immagini per ridurre il rumore di fondo casuale dipendente dall'hardware.
Per l'imaging time-lapse, attendere da tre a cinque minuti tra i singoli fotogrammi. L'imaging al microscopio a fluorescenza a campo largo ha mostrato le vescicole contenenti verde amnione purificato. Il colorante fluorescente lipofilo, FM4-64, ha confermato la presenza di membrane vescicolari.
La microscopia a illuminazione strutturata delle cellule batteriche vive che esprimono la proteina della membrana interna, CydB, fusa con il verde amnione, e VNp6-mCherry2 ha mostrato la produzione di vescicole e l'inserimento del carico.
