Trattare le AdMSC di passaggio due con terreni contenenti 10 nanogrammi per millilitro di TNF alfa per 24 ore o senza TNF alfa per le cellule non stimolate. Dopo aver lavato e incubato le cellule in terreni privi di siero per quattro ore, aggiungere 25.000 AdMSC a ciascun inserto e incubare per 24 ore a 37 gradi Celsius. Aspirare il contenuto di entrambi i pozzetti e inserirli, quindi lavare due volte con PBS lasciando un millilitro di PBS in ciascun pozzetto.
Usando una pinza, rimuovere gli inserti uno per uno e pulire delicatamente ma accuratamente la camera superiore con un batuffolo di cotone per rimuovere le cellule non migrate. Aspirare il PBS rimanente e pipettare 500 microlitri di soluzione di cristallo violetto nel pozzetto e nella camera superiore dell'inserto. Aspirare la soluzione di cristallo viola dal pozzetto e dalla camera superiore dell'inserto dopo un'ora di incubazione.
Dopo aver lavato e pulito la camera superiore, posizionare l'inserto in una nuova piastra da 24 pozzetti contenente un millilitro di PBS. Utilizzando un microscopio invertito con una fotocamera, è possibile visualizzare quattro aree casuali verso il centro dell'inserto sotto un obiettivo 10 volte. Carica le immagini sul software di elaborazione delle immagini preferito e regola lo sfondo per migliorare il contrasto con le cellule colorate di viola.
CLIA infettata con 22L ha mostrato un aumento dell'espressione di mRNA per i marcatori infiammatori CCL2, CCL5 e IL1 beta e il marcatore astrocitario S100 beta rispetto a quelli trattati con NBH. La cocoltura con AdMSC ha ridotto l'espressione delle citochine infiammatorie CCL2, CCL5 e IL1 beta, ma non il TNF alfa sia per le cellule infettate da MBH che per quelle infettate da 22L. Le BV2 cocoltivate con AdMSC hanno mostrato una diminuzione dell'mRNA per i marcatori infiammatori IL1 beta, IL-6, TNF alfa e la proteina del complemento C1qa in entrambe le cellule trattate con NBH e RML.
Inoltre, le AdMSC hanno diminuito il gene della microglia M1 CD16 e aumentato il marcatore della microglia M2 ARG-1. Il test di migrazione in vitro ha suggerito che le AdMSC hanno mostrato una migrazione significativa verso terreni contenenti l'1% di RML.
