Inizia trasferendo l'animale anestetizzato sul telaio stereotassico, quindi fissa la testa nel cono nasale e nelle barre auricolari. Posizionare le sonde per misurare il polso, la saturazione di ossigeno del polso, la pressione sanguigna e la temperatura dell'animale. Applicare un unguento per gli occhi.
Rimuovere i peli con una crema depilatoria e pulire asetticamente il cuoio capelluto con tre passaggi di iodio e alcool. Per uno studio terminale, rimuovere il cuoio capelluto utilizzando forbici chirurgiche ed esporre il cranio a circa tre millimetri dalla sutura lamboide caudalmente e tre millimetri frontalmente al bregma. Asportare il cuoio capelluto per via parietale per esporre la parte interna del muscolo temporale su entrambi i lati.
Quindi, rimuovere eventuali residui di tessuto connettivo sottocutaneo in modo che il cranio sia pulito e asciutto per applicare gli elettrodi stimolanti. Successivamente, applicare il gel conduttivo sul lato degli elettrodi che saranno a contatto con il cranio. Posizionare l'elettrodo su questo muscolo temporale e fissarlo con super colla chirurgica attorno al bordo in punti intermittenti.
Quindi, applicare la pasta di lidocaina sul muscolo temporale e sul cuoio capelluto su entrambi i lati senza disturbare gli elettrodi. Testare l'impedenza degli elettrodi stimolanti extracranici. Quindi, posizionare il mouse sotto un dispositivo di imaging a macchie laser senza elettrodi di registrazione intracranica.
Per applicare la stimolazione tra i due elettrodi tACS del cranio, utilizzare un dispositivo di stimolazione commerciale compatibile con l'uomo che eroga una corrente costante. Prima della stimolazione, ottenere una linea di base chiara. Applicare brevi periodi di stimolazione on/off a varie ampiezze su entrambi i lati del cranio.
Garantire una linea di base chiara dopo la stimolazione. Dopo che gli elettrodi di stimolazione extracranica sono stati posizionati quattro millimetri lateralmente a ciascun lato del cranio, segnare la posizione dei fori della bava a due millimetri su ciascun lato della linea mediana, a quattro millimetri di distanza l'uno dall'altro e dalla sutura ortogonale a quella sagittale. Quindi, praticare due fori per gli elettrodi di vetro.
Riempire questi fori con olio minerale sterile per impedire l'ingresso di corrente nel cranio da parte degli elettrodi extracranici. Quindi, riempire i microelettrodi di vetro con cloruro di sodio 0,2 molari e posizionarli utilizzando un micromanipolatore nei due fori di fresa posti lateralmente alla sutura sagittale. Posizionare i microelettrodi di vetro nei fori della fresa.
Successivamente, testare l'impedenza degli elettrodi di stimolazione extracranica dopo il posizionamento del foro per verificare che questi non interferiscano con il flusso di corrente nel cervello. Per misurare il flusso sanguigno cerebrale derivante dalla stimolazione extracranica, posizionare il topo sotto un dispositivo di imaging a macchie laser con elettrodi di registrazione intracranica. Una volta inseriti nel cervello, eseguire profili di profondità a varie profondità simmetriche per garantire che questi microelettrodi di vetro siano di circa un millimetro all'interno della corteccia cerebrale.
Utilizzare un sistema di digitalizzazione per registrare i dati continui dalle sonde Doppler e dai microelettrodi per una durata di base sufficientemente stabile. Quindi, applica la stimolazione on/off e prova la stimolazione cranica extra. Per gli esperimenti per indurre la depressione diffusa, aggiungere un terzo foro sul lato destro del cranio, 1,5 millimetri di sutura rostrale a coronale e un millimetro di sutura frontale laterale a posteriore.
Riempire questo foro di fresatura con KCL per un'applicazione successiva. In risposta al tACS a bassa intensità, sono stati ottenuti dati per le registrazioni elettriche CC dirette intracraniche e le registrazioni laser Doppler bilaterali del flusso sanguigno cerebrale. Una piccola risposta è stata osservata in risposta a uno stimolo di 0,75 milliampere, mentre una risposta più grande è stata osservata in risposta a uno stimolo di un milliampere.
Sia per le tracce del flusso sanguigno elettrico che per quelle cerebrali, le risposte sono state asimmetriche tra il lato destro e sinistro del cranio. L'imaging del cranio con macchioline laser del flusso sanguigno cerebrale durante gli attacchi ha mostrato un aumento del flusso sanguigno in risposta alla stimolazione, che si è diffusa uniformemente in tutta la corteccia. Dopo la stimolazione, il flusso sanguigno è tornato al basale.
