Per iniziare, preparare le gocce di M2 IBMX Medium in un piatto di coltura di tessuto plastico e posizionare il piatto su un blocco caldo a 37 gradi Celsius per almeno 30 minuti prima dell'isolamento degli ovociti. Sezionare le ovaie dei topi sottoposti a eutanasia e metterle in una provetta a fondo tondo da cinque millilitri con M2 IBMX. Trasferire le ovaie in un coperchio di plastica contenente 1,5 millilitri di M2 IBMX.
Rimuovere il tessuto adiposo periovarico o i segmenti delle tube di Falloppio e rilasciare i complessi ovocitari del cumulo mediante perforazione meccanica delle ovaie con un ago calibro 27. Trasferire i complessi di ovociti cumulali in una piastra di coltura con gocce di M2 IBMX. E rimuovere le cellule del cumulo mediante pipettaggio ripetuto utilizzando una pipetta di vetro a foro stretto.
Selezionare la vescicola germinale del nucleo circostante o gli ovociti dello stadio GV e trasferirli in una goccia di terreno M2 IBMX su un blocco caldo a 37 gradi Celsius al riparo dalla luce. Dopo aver indotto la rottura del doppio filamento con l'etoposide, posizionare gli ovociti dello stadio GV in gocce dell'agente genotossico per un'ora sul blocco caldo al buio. Aggiungere gocce di terreno di coltura M16 integrato con 400 micromolari IBMX agli ovociti per mantenerli arrestati per un periodo prolungato.
Mettere gli ovociti in un'incubatrice a 37 gradi Celsius e al 5% di anidride carbonica.
