Per iniziare, apri l'applicazione software facendo doppio clic sull'icona di un file eseguibile. Immettere le sequenze di catene pesanti e catene leggere nelle caselle di testo sotto la colonna 1 senza spazi. Per gli anticorpi bispecifici, aggiungere ulteriori catene pesanti o leggere nella seconda serie di caselle di testo sotto la colonna 2.
Lasciare vuote queste caselle per gli anticorpi monoclonali con catene pesanti e catene leggere identiche. Selezionare le caselle di controllo Ciclizzazione terminale e Ritaglio terminale C se sono applicabili queste varianti di terminale a catena pesante. Aggiungere modifiche chimiche, tra cui linker e carico utile per coniugati di farmaci anticorpali, alle scatole di modifica chimica a catena pesante e leggera utilizzando composizioni elementari come il cloruro di calcio.
Queste modifiche verranno aggiunte alla rispettiva subunità o catena proteica. Specificare il numero di legami disolfuro nelle molecole proteiche nella casella di testo contrassegnata con il numero totale di disolfuri. Immettere il numero di legami disolfuro a catena pesante non ridotti nella casella di testo disolfuri a catena pesante non ridotti e il numero di legami disolfuro a catena leggera non ridotto nella casella di testo disolfuri a catena leggera non ridotti a seconda dell'entità della riduzione.
Se la glicosilazione è presente sulla catena leggera degli anticorpi monoclonali, selezionare la casella di controllo la catena leggera è glicosilata. Fare clic sul pulsante Sfoglia per selezionare una cartella di output per la casella di testo della cartella di output e immettere il nome del file di output senza estensione nella casella di testo File Excel senza estensione. Quindi fare clic sul pulsante Invia.
Sullo schermo verrà visualizzato un messaggio di creazione del report di calcolo di massa e il file di output si trova nella cartella designata dall'utente. L'app si chiuderà automaticamente. Le composizioni chimiche, le masse calcolate, le masse misurate e gli errori di massa dei vari anticorpi monoclonali sono riassunti in questa tabella.
È stato selezionato uno standard di anticorpi monoclonali disponibile in commercio per rappresentare un anticorpo monoclonale convenzionale con catene pesanti identiche, catene leggere identiche e un sito di glicosilazione legato all'N nella regione FC. Per ampliare l'utilizzo dell'applicazione sono stati scelti anche un anticorpo monoclonale con un'ulteriore glicosilazione legata alla catena leggera, un anticorpo monoclonale bispecifico e un anticorpo monoclonale coniugato farmaco-anticorpo. I piccoli errori di massa tra le masse calcolate e le masse misurate rientravano nei normali criteri di accettazione dell'errore di massa, suggerendo che le masse calcolate erano accurate.
