Per iniziare la procedura all'interno della sala operatoria correttamente organizzata, posizionare il maiale anestetizzato nella posizione di decubito sternale e assicurarsi che tutte le linee e i tubi collegati siano fissati. Rimuovere eventuali peli residui dall'area rasata designata per la ferita utilizzando una crema depilatoria. Dopo aver sterilizzato i siti della ferita, contrassegnare l'area utilizzando una sagoma sterile per ustioni e un pennarello cutaneo chirurgico.
Impostare il bruciatore regolando il set point sull'unità di controllo a 150 gradi Celsius. Il set point basso a 145 gradi Celsius e il set point alto a 155 gradi Celsius. Utilizzando blocchi di acciaio inossidabile riscaldati collegati al dispositivo di ustione, creare una ferita da ustione a tutto spessore posizionando i blocchi sulla pelle per 60 secondi.
Scatta una foto digitale dell'intera schiena del maiale, inclusa una targhetta con il punto e la data di identificazione del maiale. Quindi scatta separatamente le immagini per ogni ferita insieme a un righello e a un cartello che mostra l'ID del maiale, l'ID della ferita e il punto temporale. Per valutare la perfusione microvascolare della ferita in tempo reale utilizzando l'imaging laser speckle o LSI, è possibile visualizzare tutte le ferite in un'unica registrazione utilizzando un imager di perfusione sanguigna LASCA.
Per misurare la perdita d'acqua transepidermica o TEWL, posizionare un coperchio pulito della sonda sopra la punta della sonda TEWL, che sarà a contatto con il tessuto della ferita. Misura ogni ferita cinque volte, prima al centro, seguita da ogni angolo. Quindi esporta tutte le letture in un foglio di calcolo.
Eseguire un'ecografia armonica o una mappatura HUSD scansionando la ferita con una sonda ecografica dalla linea mediana o dalla colonna vertebrale, partendo dalla pelle normale e spostandosi verso il lato laterale del maiale sopra le ferite fino a raggiungere nuovamente la pelle normale. Seguire lo schema di scansione per ogni ferita sia in modalità B che in modalità elastografia tissutale. Modificare l'annotazione dopo che ogni ferita è stata ripresa sia in modalità B che in modalità elasto, ovvero due registrazioni per ferita.
Una volta completata l'imaging, coprire le ferite da ustione singolarmente con medicazioni in pellicola trasparente o con la medicazione di prova. Quindi posizionare una medicazione in pellicola trasparente più grande su tutta l'area della ferita. Applicare un secondo strato di garza a rotolo intorno all'intero tronco del maiale per assorbire il liquido che trasuda dalle ferite.
Coprire la garza con uno strato di benda elastica flessibile. Copri la benda elastica con uno strato finale di nastro elastico da quattro pollici. Dopo aver interrotto il gas anestetico al termine del bendaggio, lasciare che il maiale rimanga sotto ossigeno per almeno cinque minuti.
Per inoculare le ferite da ustione il terzo giorno dopo l'ustione, disperdere l'inoculo sulla superficie delle ferite esposte utilizzando una pipetta e distribuirlo uniformemente utilizzando uno spandiconcime monouso. Per raccogliere le biopsie tissutali per l'analisi dopo l'imaging, infiltrare l'area intorno alla ferita con lo 0,5% di bupivacaina. Utilizzando un bisturi monouso con lama misura 10, tagliare una striscia larga 3-4 millimetri da un bordo all'altro della ferita, mantenendo piccoli margini di pelle normale su entrambi i lati.
Tagliare una biopsia di 6 millimetri dalla ferita dal letto della ferita o dal bordo della ferita. Ottenere l'emostasi dopo la raccolta dei campioni premendo delicatamente la ferita con una garza sterile. Coprire la ferita con una medicazione non aderente e fasciarla come dimostrato in precedenza.
L'analisi del campione bioptico mediante colorazione con ematossilina ed eosina ha mostrato distorsioni e necrosi di tutti gli strati istologici della pelle. Il biofilm stabilito è stato ulteriormente convalidato al settimo giorno dopo l'inoculazione da parte dell'unità formante colonia. Scansiona l'imaging al microscopio elettronico e la colorazione a immunofluorescenza.
Le ferite da ustione hanno mostrato una spessa membrana biogenica sulla superficie della ferita entro il settimo giorno dopo l'inoculazione, confermando l'infezione e l'instaurazione del biofilm. L'area della ferita ha iniziato a ridursi entro il giorno 14, ma la guarigione incompleta a circa il 25% delle dimensioni originali della ferita è stata osservata entro il giorno 56, indicando la cronicità della ferita. La cronicità della ferita e la compromissione della guarigione della ferita sono state ulteriormente confermate dal TEWL che mostra un'elevata perdita di acqua transepidermica in tutti i punti temporali misurati.
Ciò è stato confermato anche dalla soppressione delle proteine giunzionali strette, ZO-1 e 2, e dal ripristino alterato della funzione di barriera cutanea.
