Dopo aver anestetizzato il topo, pizzica delicatamente una delle zampe del topo per verificare se il topo è adeguatamente anestetizzato. Somministrare gocce di soluzione oftalmica all'1% di tropicamide per dilatare gli occhi del topo e attendere 30 secondi. Quindi, per ridurre il movimento degli occhi e il battito delle palpebre, applicare gocce di cloridrato allo 0,5% di proparacaina su entrambi gli occhi, seguite da gocce di gel per gli occhi lubrificanti e posizionare il mouse su un cuscinetto d'acqua riscaldante.
Preparare una miscela colorante contenente un volume uguale di verde indocianina, o ICG, e colorante fluoresceina. Iniettare 250 microlitri della miscela attraverso un'iniezione intraperitoneale nel quadrante inferiore sinistro vicino alle zampe posteriori del topo, posizionandolo parallelamente alla pelle per prevenire la perforazione dell'organo. Ritrarre con cautela lo stantuffo, assicurandosi che il sangue non sia entrato nel cappuccio della siringa.
Procedere iniettando gradualmente il colorante a ritmo costante. Quindi, posiziona il mouse sul termoforo della piattaforma di imaging. Regola la posizione del corpo del mouse con un angolo di 45 gradi rispetto alla fotocamera e inclina delicatamente la testa leggermente verso il basso.
Strofinare delicatamente l'occhio da riprendere utilizzando un batuffolo di cotone per rimuovere lo strato di colliri o gel lubrificanti. Spostare la telecamera verso l'occhio del mouse e selezionare il canale FA dal modulo di acquisizione. Disporre la testa del mouse in modo che il nervo ottico sia centrato sullo schermo, evitando la necessità di inclinare l'oftalmoscopio a scansione laser.
Passare ora al canale ICGA sul modulo di acquisizione. Una volta che l'occhio occupa l'intero schermo sul software di imaging, ruotare il pulsante nero rotondo sul modulo di acquisizione per regolare la sensibilità dell'immagine. Utilizzare la manopola dell'oftalmoscopio per regolare con precisione la messa a fuoco.
Quindi, premere il pulsante nero rotondo sul modulo di acquisizione per normalizzare l'immagine. Dopo la normalizzazione, fare clic sul pulsante ACQUIRE sul pannello touchscreen per salvare l'immagine. Passare al canale FA utilizzando il modulo di acquisizione e regolare sia la sensibilità che la messa a fuoco di ciascuna immagine come mostrato in precedenza per catturare la perdita della neovascolarizzazione coroideale o della lesione CNV.
Quindi acquisire immagini per la fase iniziale di ICGA e FA tre o quattro minuti dopo l'iniezione. Una volta acquisite tutte le immagini necessarie, applicare un lubrificante o un unguento in gel sull'occhio del topo. La CNV capillare domina le lesioni della CNV nei topi giovani.
Al contrario, i topi anziani mostrano CNV arteriolare, caratterizzata da vasi di grande calibro, anse vascolari e connessioni anastomotiche. Sia i topi giovani che quelli anziani mostrano una chiara visibilità della vascolarizzazione retinica in FA.In le immagini ICGA dei topi giovani, la vascolarizzazione retinica non è visibile e i vasi coroideali appaiono sbiaditi. Nelle immagini ICGA di topi anziani, si può osservare una vascolarizzazione retinica parziale mentre i vasi coroideali appaiono sbiaditi.
La CNV arteriolare nei topi anziani mostra una dimensione maggiore della CNV e una perdita significativamente maggiore rispetto alla CNV capillare nei topi giovani.
