Per iniziare, somministrare analgesia per via sottocutanea al ratto anestetizzato a cui è stato precedentemente iniettato per via intracerebroventricolare il cocktail di rilascio. Montare il ratto sul telaio stereotassico. Fissare la testa utilizzando le barre auricolari, assicurandosi che il movimento rotatorio verso la parte anteriore e posteriore non sia ostruito.
Stabilizzare la testa verso il basso con un angolo di 40 gradi per estendere correttamente la parte posteriore del collo. Radere il pelo del collo con un rasoio e disinfettare la pelle con tre cicli alternati di iodio povidone al 10% e alcol utilizzando tamponi di cotone sterili, strofinando in direzioni diverse per tre-cinque secondi ogni volta. Con la punta del dito, individuare l'area depressiva di forma rotonda tra la protuberanza occipitale e la colonna vertebrale dell'atlante.
Segna questo punto usando un pennarello. Fissare una siringa da un millilitro al telaio stereotassico. Posizionare l'ago in modo che entri in contatto con la pelle in corrispondenza del segno.
Usando una pinza, sollevare la pelle mentre si inserisce la siringa attraverso gli strati di pelle. Tirare indietro delicatamente lo stantuffo per creare una pressione negativa all'interno della siringa. Inserire gradualmente l'ago fino a quando il liquido cerebrospinale è visibile nella siringa.
Tenere fermo l'ago in questa posizione e consentire il lento flusso del liquido cerebrospinale. Rimuovere lentamente il liquido cerebrospinale fino a 120 microlitri. Recuperare con cautela la siringa.
Somministrare un millilitro di siero normale per via intraperitoneale per favorire il rifornimento di liquidi dell'animale da esperimento. Combinare la biopsia liquida con 400 microlitri di terreno di coltura con cellule staminali neurali e conservare la provetta da microcentrifuga a quattro gradi Celsius per un uso successivo. Quindi trasferire l'animale nell'area di monitoraggio post-operatorio.
Le biopsie di mungitura hanno portato a colture di cellule staminali neurali con una media di 3,17 passaggi, raggiungendo anche nove passaggi. Le cellule raccolte sono state piastrate su pozzetti rivestiti di poli-D-lisina dove sono cresciute sia come monostrati aderenti che più raramente come neurosfere. Le cellule appena isolate che erano positive alla GFAP erano anche immuno-positive per il marcatore quiescente ID3 e avevano la caratteristica morfologica bipolare NSE.
Il confronto immunocitochimico delle cellule derivate da biopsia e post-mortem ha mostrato che il profilo delle cellule raccolte era simile a quello delle cellule endogene della zona subependimale. Il fattore di crescita ha determinato un concomitante e significativo aumento delle cellule SOX2 e una diminuzione dei neuroblasti doppi positivi alla cortina in entrambi i campioni.
