Accendere il laser e attendere 30 minuti affinché l'alimentazione si stabilizzi. Impostare la lunghezza d'onda a 920 nanometri e la potenza a circa 50 milliwatt sul campione. Posiziona la camera di registrazione con il pesce zebra trattenuto dalla testa sulla piattaforma sperimentale.
Posizionare la lente dell'obiettivo vicino alla superficie del prosencefalo. Per la registrazione del comportamento, accendere le luci a infrarossi a 810 nanometri su entrambi i lati del serbatoio. Selezionare la sorgente di ingresso per la visualizzazione VR e avviare la registrazione dei dati.
Quindi, apri l'otturatore laser e abilita il tubo moltiplicatore fotografico. Sollevare gradualmente la lente dell'obiettivo fino a rivelare il prosencefalo dorsale. Utilizzare un attuatore piezoelettrico per acquisire immagini a più profondità per aumentare il numero di neuroni registrati.
L'imaging del calcio a due fotoni registra l'attività dei singoli neuroni nel prosencefalo dorsale fino a 200 micron di profondità attraverso crani intatti. L'intervallo di imaging comprende le aree paleo, Dm, cDc, rDc e parte del Dl che copre il 30% del prosencefalo adulto del pesce zebra. La registrazione comportamentale simultanea eseguita durante l'imaging cerebrale consente l'identificazione dei correlati neuronali delle uscite motorie.
Durante l'imaging, i movimenti della coda non dovrebbero causare artefatti di movimento visibili.
