Per il recupero dell'EPF dalla libreria fungina, iniziare spalmando gli isolati fungini su una piastra SDA a un quarto di resistenza. Incubarlo al buio a 25 gradi Celsius per 10-14 giorni prima della raccolta dei conidi. Successivamente, pipettare 2-3 ml di 0,03% Tween 80 su una piastra di coltura.
Quindi utilizzare un anello di inoculazione per raschiare i conidi. Quindi, trasferire la sospensione fungina in una provetta da centrifuga. Agitare vigorosamente la sospensione alla massima velocità, quindi pipettare un campione in un emocitometro per contare il numero di conidi.
Diluire i conidi all'interno della sospensione utilizzando lo 0,03% di intercapedine 80 fino ad ottenere la concentrazione desiderata. Per preparare la camera di inoculazione, tagliare prima un disco fogliare di 9 centimetri di diametro utilizzando la capsula di Petri inferiore come stampo o con le forbici. Successivamente, prepara l'agar all'1,5% di acqua per ogni piatto usando un microonde.
Versare 30 mL di agar d'acqua raffreddata nella capsula di Petri e lasciarla solidificare in una cappa a flusso laminare. Quando la superficie dell'agar è semisolida, posizionare il disco fogliare con la superficie abassiale rivolta verso l'alto, quindi premerlo leggermente per incorporarlo nell'agar. Ora, posiziona 20 adulti atteri sul disco fogliare.
Aprire il coperchio della camera di inoculo per spruzzare 0,3 mL di sospensione di conidi direttamente sugli afidi e sul disco fogliare. Una volta che la sospensione si è asciugata, chiudere il coperchio per evitare l'annegamento degli afidi della senape. Successivamente, sigillare la camera di inoculazione utilizzando una pellicola di paraffina per mantenere un elevato livello di umidità.
Porre la camera in un'incubatrice posta a una temperatura di 25 gradi Celsius con un fotoperiodo di luce e buio di 12 ore ciascuno. Usa uno stereomicroscopio per contare la mortalità ogni 12 ore per 5 giorni. Lo screening della virulenza ha rivelato un tasso di sopravvivenza costante per gli afidi della senape con il gruppo di controllo che ha mostrato un tasso di sopravvivenza dell'85%.
Cordyceps cateninnulata ha dimostrato la più rapida capacità di uccidere gli afidi, con una moralità del 50% e del 90% a 3 giorni e 4,5 giorni dopo l'inoculazione, o DPI. I ceppi di Beauveria 141, 143 e 153 hanno mostrato capacità lente di uccidere gli afidi con solo il 5% di mortalità a 3 DPI. A parte Purpureocillium, la maggior parte degli isolati di EPF ha mostrato tassi di mortalità corretti superiori al 70% entro 5 DPI.
Beauveria bassiana ha dimostrato il più alto tasso di mortalità del 100% tra gli isolati EPF. La micosi EPF è stata osservata su cadaveri di afidi della senape infettati da specie Metarhizium, specie Beauveria, Purpureocillium lilacinum e Cordyceps cateniannulata durante lo screening della virulenza.
