Dopo aver preparato il topo per l'intervento chirurgico, identificare l'area bersaglio, sette millimetri a sinistra dello sterno e circa sette millimetri sopra il margine sottocostale. Sollevare la pelle sopra l'area identificata usando una pinza e praticare un'incisione circolare di 10 millimetri utilizzando forbici affilate per micro dissezione per tagliare solo la pelle. Quindi rimuovere i tessuti molli sopra la gabbia toracica e cauterizzare i principali vasi sanguigni su entrambe le estremità utilizzando una penna per cauterizzazione.
Sollevare la sesta o settima costola con una pinza e utilizzare una singola lama delle forbici da microdissezione smussate per perforare il muscolo intercostale. Ora ruotare delicatamente le forbici e praticare un'incisione di circa 10 millimetri nello spazio intercostale evitando il contatto con il tessuto polmonare e le costole. Rilasciare delicatamente l'aria compressa al polso o alla mano per determinare l'intensità del flusso adatta e liberare l'ugello dai detriti.
Quindi applicare brevi getti d'aria sull'incisione per evitare di causare lesioni polmonari. Con la pinza, sollevare la sesta o settima costola e inserire il divaricatore nell'incisione intercostale con lame parallele alla parete toracica. Quindi rilasciare con cautela la maniglia per consentire l'apertura del divaricatore e rivelare gradualmente il polmone.
Ora applicare due o tre gocce di PBS sterile riscaldato a 37 gradi sul tessuto polmonare esposto per evitare che si secchi. Sovrapponi un pezzo di foglio di alluminio con un piccolo ritaglio sopra il topo, posizionandolo direttamente sul tessuto polmonare esposto. Assicurati che il ritaglio mostri solo il torace aperto e il tessuto vicino per una fotoconversione polmonare mirata.
Quindi posiziona una scatola con un ritaglio sopra il mouse e un foglio di alluminio, assicurandoti che il ritaglio sia allineato con il polmone esposto. E posiziona la lampada di conversione delle foto direttamente sopra il ritaglio sulla scatola. Quindi attivare la lampada di conversione fotografica per illuminare il tessuto polmonare esposto per un intervallo continuo di sei minuti.
Dopo la conversione delle foto, disattiva la lampada e allontana la scatola della lampada e la maschera in foglio di alluminio dal mouse. Separare il polmone dalla parete toracica scaricando l'aria dal polso, quindi scaricare l'aria dall'incisione toracica. Afferrare saldamente la maniglia del divaricatore e premerla per chiudere le lame.
Manovrare con cautela il divaricatore chiuso fuori dallo spazio intercostale, assicurandosi di non entrare in contatto con il tessuto polmonare. Quindi utilizzare la sutura di seta 5-0 per chiudere l'incisione intercostale con un semplice modello di sutura continuo, assicurandosi che la costola su entrambi i lati dell'incisione sia incorporata. Tirare con decisione la sutura per assicurarsi che i bordi della ferita siano allineati, ristabilendo l'integrità della parete toracica.
Fissare la sutura annodando l'estremità quattro volte. Taglia le code di sutura il più vicino possibile al nodo e chiudi la pelle usando graffette chirurgiche. Per rimuovere l'aria in eccesso dalla cavità toracica, inserire una siringa da un millilitro con un ago calibro 28 sotto il processo xifoideo.
Riportare la siringa a circa un millilitro. Rimuovere la siringa dal mouse e scaricare l'aria. Vengono mostrate immagini di metastasi polmonari esprimenti Dendra2 esposte prima dell'esposizione alla luce blu.
L'esposizione alla luce blu delle metastasi polmonari che esprimono Dendra2 ha mostrato che l'esposizione di sei minuti ha prodotto il segnale più luminoso nel canale fotoconvertito sia nei campioni ex vivo che in vivo. Le cellule fotoconvertite e non fotoconvertite sono state identificate in tutti e tre i tipi di tessuto di topi sottoposti a intervento chirurgico con esposizione alla luce blu. Solo cellule tumorali non fotoconvertite sono state trovate nei tessuti dei topi che hanno subito un intervento chirurgico senza esposizione alla luce blu.
