Iniziare preparando un punzone bioptico di 3,5 millimetri di diametro. Segnare un punto sull'albero del punzone a cinque millimetri distale dal bordo. Fissare il punzone e utilizzare un utensile rotante a due velocità per recidere la sezione distale contrassegnata dell'albero.
Taglia l'asta a una profondità di 3,5 millimetri, lasciando attaccati gli ultimi 1,5 millimetri, e piega la punta a 90 gradi. Successivamente, preparare il PBS in 900 millilitri di acqua distillata e regolare il pH a 7,4. Quindi portare la soluzione a un volume finale di un litro aggiungendo acqua distillata.
Preparare una soluzione di aldeide paraforma al 4% sciogliendo due grammi di aldeide paraforma in 45 millilitri di PBS sotto una cappa chimica e riscaldarla a 65 gradi Celsius regolando il pH a 7,4. Una volta che l'aldeide della paraforma è completamente disciolta, regolare il volume finale della soluzione a 50 millilitri. Pesare il topo per determinare il volume corretto del cocktail anestetico iniettabile per la somministrazione.
Una volta somministrata l'anestesia, posizionare il topo sul tavolo operatorio, aderendo ai principi standard della chirurgia dei roditori. Quindi posizionare un cuscino alto cinque millimetri sotto la testa del roditore in posizione di decubito laterale. Asciugare accuratamente la superficie oculare con una lancia chirurgica per gli occhi e tagliare ordinatamente le ciglia.
Regolare il microscopio operatorio per una visione ottimale del topo anestetizzato e impostare il timer su 30 secondi. Quindi esaminare la circonferenza dell'area limbare utilizzando il microscopio operatorio mantenendo le palpebre del topo spalancate utilizzando il pollice e l'indice. Ora tenere con cautela la trefina del punzone sterilizzato parallela all'asse degli occhi senza applicare una pressione verso il basso.
Evitare di ruotare lo strumento e mantenere l'asse del punzone parallelo all'asse del globo. Chiedere all'assistente chirurgico di mettere tre gocce di soluzione di idrossido di sodio nel foro del punzone. Dopo 30 secondi, detergere la cornea e il fornice utilizzando cinque millilitri di PBS.
Quindi utilizzare una carta indicatrice di pH universale per garantire un valore di pH compreso tra sette e 7,5 sulla superficie corneale dell'occhio ferito. Dopo la procedura, lavare, asciugare e igienizzare il punch trephine e il tavolo operatorio con etanolo al 70%. Esamina gli occhi di un topo anestetizzato sotto un biomicroscopio con lampada a fessura e usa una fotocamera per catturare le immagini.
Quindi applicare colliri fluorescenti allo 0,1% e immergere il liquido fluorescente in eccesso con un applicatore di cotone. Valutare l'eventuale presenza di difetti epiteliali corneali utilizzando il filtro blu cobalto e scattare fotografie. Successivamente, applicare l'unguento oftalmico antibiotico triplo sulla superficie oculare danneggiata.
Nucleare l'occhio preservando la caruncola mediale e l'intera congiuntiva palpabile. Al microscopio operatorio, sezionare delicatamente la giunzione tra la caruncola e la pelle. Usando una pinza dentale, ritrai la caruncola e aiuta a guidare le forbici chirurgiche sotto la congiuntiva palpabile, dirigendoti verso la sua giunzione con la placca tarsale.
Tagliare la congiuntiva lungo la linea di adesione verso il canto laterale. Quindi ruotare le forbici chirurgiche sulla giunzione della congiuntiva e della placca tarsale inferiore sul piano sottocongiuntivale. Ora ritrai le palpebre superiori e inferiori dal lato nasale usando il pollice e l'indice.
Durante la retrazione, guidare la punta della pinzetta a punta curva dietro la ghiandola lacrimale sporgente, spostandosi verso il nervo ottico. Afferrare saldamente il nervo ottico ed estrarre il globo. Successivamente, sciacquare il globo con PBS e trasferirlo nella soluzione di fissaggio.
Viene mostrato il processo di guarigione della ferita dell'occhio di topo dopo una lesione alcalina corneale e limbare in un modello murino. L'edema corneale è prominente nei giorni zero e due, mentre la fibrosi è più evidente durante la seconda settimana dopo l'infortunio. Il difetto epiteliale è guarito dalla migrazione delle cellule epiteliali congiuntivali in un modello centripeto in 12-14 giorni.
Tuttavia, il 50% degli occhi danneggiati ha sviluppato difetti epiteliali persistenti alla fine della seconda settimana.
