Inizia posizionando un topo anestetizzato sul lato destro su un supporto chirurgico riscaldato per esporre l'addome sinistro. Ancorare l'estremità anteriore e gli arti posteriori del mouse con del nastro di carta, garantendo la visibilità della milza. Successivamente, disinfettare la pelle nel sito chirurgico applicando generosamente l'antisettico.
Verificare che il topo sia completamente anestetizzato somministrando un pizzicotto per le dita dei piedi. Usando una pinza, solleva la pelle dell'addome superiore sinistro e fai un'incisione circolare di 10 millimetri nella pelle e nello strato muscolare usando le forbici castroviejo. Individua il pancreas attaccato alla milza per determinare la direzione in cui deve essere posizionato il punto croce.
Utilizzare una sutura di seta 5/0 per posizionare il primo punto nello strato muscolare nella posizione identificata. Fissare l'estremità con tre-cinque nodi. Continua a cucire direttamente attraverso l'incisione.
Quindi taglia e lascia una coda di circa cinque centimetri. Ripeti la cucitura, questa volta perpendicolarmente al punto originale. Quindi, solleva e posiziona con cautela il pancreas sopra il punto croce.
Posiziona un punto cordoncino a circa un millimetro dal foro, intrecciando lo strato di pelle e muscoli. Posizionare il telaio della finestra in modo che i bordi circolari dell'incisione si trovino all'interno della scanalatura della finestra. Ora, fissa la finestra impiantata legando saldamente la seta 5/0.
Caricare 100 microlitri di adesivo cianoacrilato liquido in una siringa da 10 millimetri. Applicare un delicato getto di aria compressa verso il tessuto per circa 10 secondi per asciugarlo. Usando una pinza, afferrare il telaio della finestra dal bordo esterno e sollevarlo con cautela per garantire la separazione del pancreas dalla base del telaio della finestra.
Erogare un sottile strato di adesivo cianoacrilato liquido lungo l'incavo della finestra, evitando il tessuto pancreatico. Quindi utilizzare i pickup a vuoto per sollevare il vetrino coprioggetto da cinque millimetri. Posizionare delicatamente il vetrino coprioggetto al centro del telaio della finestra ottica e mantenere una leggera pressione per circa 25 secondi per consentire all'adesivo di fissarsi.
Usando una pinza, staccare il vetrino coprioggetto dai pickup a vuoto. Quindi, stringere le suture a punto croce per fissare il pancreas al vetrino coprioggetto e tagliare le estremità della sutura. Infine, rimuovi il nastro dal mouse.
Spegnere il vaporizzatore isoflurano e riposizionare il mouse in una gabbia pulita. Dopo il periodo di assestamento è stato osservato un aumento della stabilità laterale e assiale del tessuto pancreatico. L'imaging con lo SWIP ha mostrato livelli più bassi di deriva rispetto alle finestre di imaging addominale e pancreatico.
L'imaging seriale del pancreas murino è stato eseguito dopo il trattamento con ceruleina. Il trasferimento del lobulo è stato osservato dopo due giorni consecutivi. Lo SWIP può essere utilizzato anche per l'imaging a lungo termine, consentendo la visualizzazione e la quantificazione della motilità del vacuolo.
Ad esempio, la velocità media dei vacuoli nel pancreas murino è aumentata di circa il 10% dopo il trattamento con ceruleina, rispetto alla PBS. Il trattamento con ceruleina ha anche aumentato la frequenza media di rotazione delle strutture subcellulari del 10%Tuttavia, non c'è stata alcuna differenza significativa nella velocità netta, nella direzionalità o nella distanza cumulativa tra i trattamenti. SWIP consente la visualizzazione e l'acquisizione della migrazione delle cellule tumorali.
La migrazione collettiva delle cellule tumorali a grappolo è stata osservata in brevi periodi di tempo. È stata osservata anche la migrazione di singole cellule tumorali e macrofagi.
