Per iniziare, posizionare la fetta di midollo spinale preparata nella camera di registrazione. Quindi posizionare l'anodo del sistema di micromanipolazione vicino alla linea mediana dorsale nel catodo vicino alla zona di ingresso della radice dorsale per un corretto posizionamento dello stimolatore del midollo spinale. Ora passa a una lente dell'obiettivo 60X per identificare un neurone sano con una superficie liscia e luminosa senza nuclei visibili.
Diminuire leggermente l'intensità dell'infrarosso, accendere la sorgente luminosa fluorescente e regolare il filtro della luce sull'opzione di eccitazione ultravioletta a banda larga. Ora, seleziona un motoneurone positivo al fluoro-oro appropriato e abbassa gradualmente l'elettrodo fino a quando non è vicino al neurone. Quando la pipetta entra in contatto con la sua superficie, cercare una piccola rientranza della membrana a livello del puntale e rilasciare la pressione positiva precedentemente applicata.
Quindi applicare una pressione negativa alla pipetta utilizzando una siringa e attendere che il valore della resistenza salga a gigaohm sull'interfaccia software. Bloccare il potenziale di membrana a meno 70 millivolt. Premere il pulsante di compensazione della capacità rapida sull'interfaccia software dell'amplificatore, quindi applicare una breve pressione negativa per rompere la membrana cellulare e premere il pulsante di compensazione della capacità lenta sull'interfaccia software dell'amplificatore.
Applicare la stimolazione del midollo spinale per uno o due secondi mantenendo l'ampiezza tra uno e 10 milliampere. Determinare la soglia motoria aumentando gradualmente l'ampiezza della stimolazione fino a quando non si osserva il primo potenziale d'azione. Distinguere i motoneuroni a fuoco ritardato e immediato utilizzando un'iniezione di corrente depolarizzante di cinque secondi attorno alla reobase in modalità pinza di corrente.
Dopo aver disattivato la stimolazione del midollo spinale, continuare a registrare i potenziali di membrana per catturare i potenziali d'azione spontanei che si attivano. Quando l'ampiezza della stimolazione del midollo spinale è stata aumentata, il potenziale di membrana è stato aumentato e i potenziali d'azione sono stati attivati ogni 10-20 impulsi. Dopo che la stimolazione del midollo spinale è stata disattivata, il neurone ha attivato una serie di potenziali d'azione spontanei per un breve periodo di tempo.
Quindi, il potenziale di membrana a riposo è tornato a meno 65 millivolt.
