Per iniziare, posiziona i campioni di coaguli di sangue cerebrale raccolti su un piatto pulito usando una pinzetta. Quindi, utilizzando una pipetta, aggiungere cinque millilitri di soluzione fisiologica e agitare delicatamente il piatto. Rimuovere la soluzione fisiologica utilizzando una pipetta.
Usando un paio di forbici, taglia i coaguli a pezzetti. Ancora una volta, aggiungere cinque millilitri di soluzione fisiologica ai coaguli e agitare delicatamente la capsula prima di aspirare la soluzione fisiologica con una pipetta. Quindi, usando una pinzetta, trasferisci i pezzi di coaguli su una nuova piastra a U pulita.
Preparare la soluzione di lavoro SFE regolando la concentrazione di SFE a 2.000 unità per millilitro utilizzando soluzione fisiologica. Aggiungere 300 microlitri della soluzione di lavoro SFE ai coaguli pretrattati. Per avviare il primo ciclo di degradazione, incubare la miscela di SFE e coaguli a 37 gradi Celsius per mezz'ora.
Successivamente, agitare delicatamente per mescolare il campione trattato con SFE. E usando una pipetta pulita, trasferisci la parte liquida in una provetta sterile. Mettere da parte il coagulo rimanente per un altro ciclo di degradazione.
Centrifugare il liquido raccolto a 200 g per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Successivamente, utilizzando una pipetta, trasferire il surnatante o la soluzione SFE recuperata in un'altra provetta pulita. Risospendere il pellet cellulare risultante in 50 microlitri di soluzione fisiologica mescolando delicatamente.
Successivamente, eseguire cicli successivi di degradazione sui coaguli rimanenti utilizzando la soluzione SFE recuperata come dimostrato in precedenza. Raccogliere la miscela cellulare da ogni ciclo di degradazione per preparare il campione di cellule del sangue. Aggiungere cinque microlitri del campione di cellule ottenuto al vetrino rivestito di poli-L-lisina.
E usando un vetrino coprioggetto, spalmare le celle. Lasciare evaporare il liquido a temperatura ambiente. Per eseguire la colorazione cellulare, aggiungere delicatamente 100 microlitri di colorante per diritti allo striscio cellulare.
Lasciare colorare le cellule per 30 minuti a temperatura ambiente prima di risciacquare delicatamente il colorante con acqua pulita. Infine, esamina le cellule colorate usando un microscopio ottico. Coaguli di sangue rossi compatti con una soluzione di lavoro incolore sono stati osservati durante la fase iniziale della degradazione.
La dissoluzione del coagulo è stata osservata dopo un'incubazione di 30 minuti e un'incubazione prolungata fino a cinque ore ha sciolto la maggior parte dei coaguli, mentre non c'è stato alcun cambiamento significativo nel gruppo di controllo negativo, anche dopo un'incubazione di 10 ore. Dopo una corretta colorazione, i globuli rossi maturi, le piastrine e i vari granulociti erano chiaramente identificabili al microscopio ottico. I componenti cellulari potrebbero essere analizzati quantitativamente con l'aiuto dell'autoematologia con successo.
