Per iniziare, posizionare il topo anestetizzato sul tavolo operatorio. Mantenere la temperatura corporea utilizzando una sonda rettale collegata a un termoforo. Praticare un'incisione sulla pelle della testa in direzione della sutura sagittale, partendo dalle orecchie fino alla zona tra gli occhi.
Ritrarre la pelle e rimuovere il periostio sul lato destro del cranio. Quindi trova le coordinate, 2,5 millimetri laterali da bregma. Applicare il cianoacrilato al supporto doppler e fissarlo per la flussimetria laser-doppler.
Dopo che la colla si è asciugata, collegare la sonda doppler. Quindi, verificare la corretta lettura del segnale per valutare il flusso sanguigno cerebrale. Per eseguire l'occlusione dell'arteria, capovolgere il mouse in posizione supina e fissarlo al tavolo operatorio con del nastro adesivo.
Quindi praticare un'incisione sulla linea mediana del collo. Tirare la pelle lateralmente, quindi allontanare le ghiandole salivari utilizzando i divaricatori. Questo espone il territorio carotideo.
Identificare l'anatomia vascolare dell'arteria carotide comune, o CCA, ICA e ECA, nonché le diverse arterie da esse derivate. Per una più facile manipolazione, staccare il CCA, seguito dall'ECA dal tessuto connettivo. Quindi cauterizzare l'arteria tiroidea superiore e staccare l'ICA dal tessuto connettivo.
Controllare di nuovo per assicurarsi che le arterie principali siano completamente staccate dal tessuto connettivo. Successivamente, avvolgere le suture di seta 6-0 attorno all'ECA in corrispondenza della biforcazione linguale mascellare. Quindi suturare intorno al CCA.
Posizionare una clip vascolare che interrompa la circolazione sanguigna dall'ICA. Praticare una piccola incisione nell'ECA vicino all'area in cui si trova il nodo stretto. Inserire il monofilamento fino a quando lo spesso rivestimento non è completamente penetrato nel lume arterioso.
Stringere il secondo nodo per trattenere il monofilamento all'interno dell'arteria ed evitare che la pressione esercitata dal sangue lo spinga fuori. Tagliare l'ECA sotto il primo nodo e ruotare il moncone per orientarlo in direzione dell'ICA. Far avanzare il monofilamento attraverso l'ICA fino al punto in cui l'MCA si dirama.
L'occlusione si riflette in un brusco calo del flusso sanguigno nella lettura LDF. Dopo 40 minuti, anestetizzare nuovamente il topo e riposizionarlo sul tavolo operatorio. Togliete i punti dal collo.
Dopo 45 minuti di occlusione, allentare il nodo che tiene in posizione il monofilamento. Tirare lentamente e delicatamente il filamento e controllare che si verifichi la ricanalizzazione del tessuto. Quindi estrarre il filamento e stringere il nodo per evitare la perdita di sangue, pulire il sangue e sciogliere il nodo CCA.
Assicurarsi che non vi siano danni alla parete arteriosa. Rimuovere i divaricatori e riposizionare i muscoli, le ghiandole e la pelle. Suturare la pelle con una sutura 6-0 e applicare il disinfettante.
Scollegare la sonda Doppler e staccare il supporto. Infine, suturare e disinfettare la pelle della testa. L'esito della procedura di occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media è stato valutato utilizzando la neuroimaging MRI in vivo.
L'evoluzione della lesione valutata in diversi momenti dopo la riperfusione ha mostrato che la progressione del volume della lesione richiede circa due giorni per essere completata. I test comportamentali, come il test della forza di presa, hanno mostrato una perdita di forza nei topi dopo 24 ore di occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media. Inoltre, dopo la stimolazione nel test d'angolo, i topi hanno mostrato una preferenza per girare sul lato destro, che era omolaterale alla lesione, indicando un'occlusione dell'arteria cerebrale media riuscita sul lato destro.
