Per etichettare i periciti, aggiungere il colorante fluorescente TO-PRO-3 al liquido cerebrospinale artificiale o ACSF. Ora incuba il cervello di ratto appena affettato nell'ACSF carico di colorante per 20 minuti in un ambiente buio a temperatura ambiente. Quindi, trasferisci il colino a rete di nylon con le fette di cervello in una camera di risciacquo a piastre a sei pozzetti.
Lascia riposare le fette di cervello nella camera per 10 minuti. Per etichettare i periciti non vitali, incubare le fette di cervello marcate TO-PRO-3 in isolectina B4 coniugata a 37 gradi Celsius per 30 minuti al buio. Dopo l'incubazione, sciacquare le fette di cervello in liquido cerebrospinale artificiale per 15 minuti.
Successivamente, metti le fette di cervello in ACSF gassate con il 5% di anidride carbonica e il 95% di ossigeno. A questo, aggiungi ioduro di propidio a una concentrazione di 37 micromolari a 37 gradi Celsius. Per arrestare l'assorbimento del colorante e ridurre al minimo l'etichettatura di fondo, risciacquare i preparati per 15 minuti in ACSF.
In condizioni fisiologiche normali, i periciti cerebrali non subiscono la morte cellulare. Sono stati rilevati periciti vitali che non sono stati colorati con ioduro di propidio. I modelli SAH dovrebbero vitalizzare i periciti all'interno della microvascolarizzazione.
Sono stati rilevati anche periciti non vitali. I periciti non vitali marcati con ioduro di propidio sono rimasti attaccati all'intera microvascolarizzazione.
