Per iniziare, incidi con cura la pelle del topo sacrificato, partendo dall'apertura del cranio ed estendendosi verso la zona frontale. Usando le forbici, solleva e rimuovi delicatamente il cranio senza danneggiare le leptomeningi, raccogliendo l'intero cervello. Immergere l'intero cervello nel tampone di lavaggio e sciacquarlo delicatamente per rimuovere il sangue superficiale.
Trasferisci il cervello in una capsula di Petri sterile senza tritare. Quindi, al microscopio, usa una pinzetta a punta fine per estrarre le leptomeningi dalla superficie del cervello. Usando delle microforbici sterili, tagliare il tessuto delle leptomeningi in frammenti.
Riparare la miscela di enzimi digestivi utilizzando i componenti indicati. Aggiungere 10 millilitri di miscela ai frammenti e incubare a 37 gradi Celsius per 15 minuti. Agitare delicatamente per staccare i frammenti dal fondo del tubo.
Quindi, aggiungere 10 millilitri di tampone di arresto. Centrifugare la sospensione a 300 g per cinque minuti a quattro gradi Celsius. E usando una pipetta, rimuovere con cura il surnatante.
Aggiungere 10 millilitri di PBS freddo e filtrare eventuali grumi attraverso un colino da 70 micron in una provetta sterile da 50 millilitri. Placcare 10 al quinto di cellule per centimetro quadrato in un pallone T25 rivestito di fibronectina con cinque millilitri di terreno di coltura e incubare a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica per 24 ore. Dopo l'incubazione, sostituire il terreno con un terreno fresco per eliminare le cellule non attaccate.
