Per iniziare, incubare le uova di gallina fecondate in un'incubatrice umidificata a 38 gradi Celsius. Quindi, posizionare un embrione di pollo di stadio da 28 a 32 in una capsula di Petri da 60 millimetri riempita con HBSS. Dopo aver sezionato la pelle e la testa dell'embrione dorsale, tirare delicatamente le gemme degli arti per riposizionare il lato ventrale del corpo verso il basso.
Ora, lungo i due lati del corpo dell'embrione, praticare un'incisione anteriore a quella posteriore. Afferra le gemme dell'arto longitudinalmente con un paio di pinze per stabilizzare il corpo. Usa una pinza da orologiaio per staccare con cura la pelle dal collo fino alla regione della coda.
Usa le forbici affilate per rimuovere delicatamente i tessuti sottocutanei rimanenti ancora attaccati alla pelle sbucciata e levigare i bordi della pelle. Successivamente, aggiungere due millilitri di DMEM integrato a ciascun pozzetto di un piatto a sei pozzetti. Dopo aver aggiunto gli antibiotici ai pozzetti, posizionare un inserto di coltura tissutale sterile all'interno del pozzetto, assicurandosi che il terreno circondi l'esterno dell'inserto di coltura.
Quindi spostare la pelle su una spatola mentre è immersa in HBSS per evitare pieghe e pieghe. Una volta fatto, trasferire la pelle asportata in una capsula contenente HBSS. Far scivolare lentamente la pelle dalla spatola sull'inserto di coltura senza piegarla.
Utilizzando una pipetta da 200 microlitri, rimuovere l'eccesso di HBSS dall'inserto. Infine, incubare le colture di espianti cutanei a 37 gradi Celsius con una miscela di 5% di anidride carbonica e 95% di aria. Sostituire il mezzo ogni due giorni.
I primordi delle piume si sono sviluppati in brevi boccioli di piume dopo due giorni di coltura. e i lunghi germogli di piume si sono sviluppati dopo quattro giorni di coltura. I placodi dermici erano più maturi nella linea mediana che ai lati.
