Per iniziare, incubare le uova di gallina fecondate in un'incubatrice umidificata. Quindi, preparare due volte la soluzione salina CMF con tampone EDTA allo 0,25%. Quindi staccare la pelle dagli embrioni di pollo in soluzione HBSS e incubarli in due volte la soluzione CMF-EDTA su ghiaccio per 15-20 minuti.
Usa un paio di pinze da orologiaio per separare accuratamente l'epitelio e il mesenchima. Quindi trasferire l'epitelio isolato e il mesenchima in un unico piatto pulito contenente HBSS. Per la ricombinazione, posizionare il mesenchima su una piastra di Petri contenente HBSS, quindi posizionare l'epitelio su di esso, allineandolo lungo l'asse anteriore/posteriore del mesenchima.
In alternativa, ruotare l'epitelio di 90 gradi rispetto all'asse mesenchimale anteriore posteriore. Quindi, trasferire le pelli ricombinate negli inserti di coltura in sei piastre di coltura a pozzetti. Rimuovere l'eccesso di HBSS che circonda la pelle ricombinata.
Dopo aver aggiunto il DMEM contenente il 10% di FBS al pozzetto esterno dell'inserto, pipettare un sottile strato di DMEM nella camera dell'inserto, assicurandosi che l'espiante rimanga semiidratato. Infine, mettere i ricombinanti cutanei in un incubatore a 37 gradi in un ambiente di 5% di anidride carbonica e 95% di aria. Monitora i cambiamenti fenotipici nelle fasi iniziali di sviluppo della pelle utilizzando la fotografia time-lapse, con un microscopio da dissezione montato.
Nuovi placodi sono apparsi poco dopo la ricombinazione e si sono sviluppati in brevi gemme di piume due giorni dopo la ricombinazione. I boccioli delle piume lunghe si sono sviluppati in quattro giorni. Quando l'epitelio veniva ruotato di 90 gradi, l'orientamento delle nuove gemme era determinato dall'epitelio.
