Per iniziare, metti il dispositivo gut-on-a-chip in un forno asciutto impostato a 60 gradi Celsius per 30 minuti per eliminare l'umidità. Quindi, utilizzando un generatore di ozono UV, esporre il dispositivo al trattamento UV e ozono per 60 minuti. Fissare il tubo di ingresso, bypass e uscita del microcanale superiore utilizzando clip di legatura.
Piantare il tubo di ingresso per il microcanale inferiore, quindi scollegare il tubo di uscita per il microcanale inferiore. Assicurarsi che il tubo di bypass del microcanale inferiore rimanga aperto. Utilizzando una micropipetta P100, aggiungere 100 microlitri di una soluzione di polietilenimmina all'1% attraverso il foro di uscita del microcanale inferiore.
Ricollegare il tubo di uscita per il microcanale inferiore. Fissare il bypass di ingresso e il tubo di uscita del microcanale inferiore, seguito dal tubo di ingresso per il microcanale superiore utilizzando clip di legatura. Ora scollegare il tubo di uscita per il microcanale superiore, assicurandosi che il tubo di bypass rimanga aperto.
Successivamente, aggiungere 100 microlitri di una soluzione di polietilenimmina all'1% attraverso il foro di uscita del microcanale superiore. Ricollegare il tubo di uscita del microcanale superiore e lasciare incubare il dispositivo a temperatura ambiente per 10 minuti. Ripetere la procedura con glutaraldeide allo 0,1% e poi con acqua deionizzata per rimuovere l'eventuale soluzione di attivazione superficiale in eccesso.
Asciugare la patatina per una notte a 60 gradi Celsius in forno. Il giorno dopo, togliete la patatina dal forno e lasciatela raffreddare in un armadio di sicurezza biologica per 10 minuti. Fissare il tubo di ingresso, bypass e uscita del microcanale superiore, incluso il tubo di ingresso del microcanale inferiore utilizzando clip di legatura.
Scollegare il tubo di uscita per il microcanale inferiore. Aggiungere 20 microlitri di matrice extracellulare, o miscela ECM, attraverso il foro di uscita del microcanale inferiore. Quindi ricollegare il tubo di uscita per il microcanale inferiore.
Fissare il tubo di ingresso, bypass e uscita del microcanale inferiore, compreso il tubo di ingresso del microcanale superiore con clip di legatura. Dopo aver scollegato il tubo di uscita per il microcanale superiore, aggiungere 20 microlitri di miscela VCM attraverso il foro di uscita del microcanale superiore. Ricollegare il tubo di uscita del microcanale superiore, quindi rimuovere la clip del legante dal tubo di uscita del canale inferiore, assicurandosi che entrambi i tubi di uscita siano aperti.
Metti il chip in un'incubatrice a 37 gradi Celsius al 5% di anidride carbonica per un'ora.
