Preparing Cells to Assemble a 3D Human-Stem-Cell-Derived In Vitro Blood Brain Barrier

Inizia preparando le cellule endoteliali differenziate, i parassiti e gli astrociti per assemblare il modello iBBB. Dopo aver aspirato il terreno di coltura cellulare dalle cellule endoteliali differenziate, lavare le cellule con PBS una volta, quindi aggiungere una miscela di proteasi collagenasi alle cellule lavate e dissociare le cellule a 37 gradi Celsius per cinque minuti. Trasferire la miscela di proteasi collagenasi con le cellule dissociate in una provetta conica contenente hECSR, mantenendo un rapporto 1:3 tra la miscela e hECSR, quindi centrifugare le cellule a 300 G per tre minuti e aspirare il surnatante prima di risospendere il pellet cellulare risultante nell'hECSR.

Dissociare i parassiti differenziati con la miscela di proteasi collagenasi a 37 gradi Celsius per cinque minuti. Aggiungere la quantità appropriata di N2B27 in una provetta conica e trasferire le cellule dissociate nella miscela di proteasi collagenasi su di essa, mantenendo un rapporto 1:3 della miscela con N2B27. Far girare le cellule a 300 G per tre minuti.

Dopo aver aspirato il surnatante, risospendere il pellet cellulare in N2B27. Dissociare gli astrociti differenziati con la miscela di proteasi collagenasi a 37 gradi Celsius per cinque minuti. Trasferire le cellule dissociate nella miscela di proteasi collagenasi in una provetta conica contenente terreno astrocitario completo con un rapporto 1:3 tra la miscela e il terreno.

Dopo aver centrifugato le cellule a 300 G per tre minuti, aspirare il surnatante e risospendere il pellet cellulare in mezzo astrocitario completo. Le celle sono ora pronte per l'assemblaggio dell'iBBB.