Espressione e purificazione ad alto rendimento di vettori di soluti umani per studi strutturali e biochimici

I vettori di soluti, o SLC, sono responsabili dell'assorbimento dei nutrienti e sono coinvolti nelle malattie umane. Tuttavia, ci sono pochi farmaci che prendono di mira gli SLC perché sono scarsamente studiati. Abbiamo sviluppato approcci efficienti per clonare, esprimere e purificare gli SLC.

Il nostro flusso di lavoro produce proteine pure, consentendo studi biochimici e strutturali e, in ultima analisi, fornisce approfondimenti per le campagne di scoperta di farmaci. Con i numerosi ruoli nei processi biologici, nelle malattie e nella somministrazione di farmaci, le SLC hanno ricevuto sempre più attenzione e sono diventate bersagli terapeutici interessanti. I progetti pubblici e privati ReSOLUTE IMI hanno generato risorse e dati ad accesso aperto per consentire nuove scoperte nella funzione, nella fisiologia, nella patologia e nel targeting terapeutico di SLC.

Tradizionalmente, le SLC erano difficili da studiare in quanto sono proteine integrali di membrana con vari substrati e diversi meccanismi di trasporto. Recentemente, Cryo-EM, il sistema di espressione BacMam e nuovi reagenti di solubilizzazione hanno portato a un cambiamento radicale nella loro caratterizzazione. I campioni di proteine pure sono necessari per gli studi biochimici e strutturali.

Nell'uomo, i vettori di soluti hanno spesso una scarsa resa quando sono sovraespressi e instabili quando vengono purificati. Pertanto, in passato, ogni obiettivo richiedeva anni per sviluppare singole strutture per produrre il campione proteico per le applicazioni a valle. Il nostro metodo è ottimizzato per lo studio parallelo ed economico di più bersagli o costrutti di un singolo bersaglio.

Pertanto, bilancia attentamente la flessibilità sperimentale, i costi, i tempi e le risorse di laboratorio. Inoltre, offriamo l'accesso aperto a tutti i nostri protocolli e risorse in questo articolo e nel portale web ReSOLUTE.