Reviving the Cryopreserved Day 32 hESC-Derived Photoreceptor Progenitors

Inizia mettendo il PRDM a bagnomaria a 37 gradi Celsius. Rimuovere dall'azoto liquido un crioviale contenente cellule progenitrici dei fotorecettori derivate da hESC del giorno 32 e conservarlo su ghiaccio secco. Quindi scongelare il crioviale a bagnomaria a 37 gradi Celsius per tre-cinque minuti.

Risospendere le cellule in un millilitro di PRDM. Centrifugarli a 130 G per quattro minuti Dopo aver rimosso il surnatante, risospendere il pellet in un millilitro di PRDM. Per contare le cellule, prelevare 10 microlitri della sospensione cellulare e mescolare con lo 0,2% di blu di tripano, seguendo le istruzioni del produttore.

Pipettare la miscela cellulare nel vetrino della camera di conteggio delle cellule e determinare il numero di cellule e la vitalità utilizzando un contatore di cellule automatizzato. Se la vitalità cellulare è superiore al 70%, centrifugare la sospensione cellulare rimanente a 130 G per quattro minuti. Rimuovere il surnatante e sospendere nuovamente il pellet cellulare in PRDM per il trapianto.

Utilizzando un puntale per pipette da 10 microlitri, sospendere nuovamente i grumi di cellule nella provetta per microfuge fino a quando non sono visibili grumi. Caricare la sospensione in una siringa per iniezione calibro 33 e confermare l'estrusione della soluzione cellulare attraverso l'ago.