Per iniziare, iniettare un analgesico preventivo in un topo anestetizzato. Usando le tosatrici, radere la testa del mouse. Installare l'animale su un tavolo stereotassico e posizionare correttamente le barre auricolari.
Fissare la bocca del mouse al pezzo del mouse e posizionare con cura la lingua all'esterno per evitare il soffocamento. Dopo aver controllato la profondità dell'anestesia, posizionare il supporto di elevazione sotto l'animale per assicurarsi che il corpo e la testa rimangano livellati orizzontalmente. E usa un tampone caldo con carta per mantenere la temperatura dell'animale.
Applicare l'unguento su entrambi gli occhi per prevenire la secchezza. Quindi, usando iodio e alcol, disinfetta la testa del topo. Usa un bisturi per praticare un'incisione lungo la linea mediana della testa con il taglio che si estende da dietro gli occhi per postare la sutura lambda.
Esporre il cranio e tamponarlo con una punta di cotone sterile imbevuta di soluzione di cloruro di sodio 0,9. Al microscopio stereoscopico, identifica la vena rostrale del reno o RRV e usa una matita sterile per contrassegnarla. Usando un ago sterile come riferimento, confermare l'orientamento del cervello.
Assicurarsi che le coordinate DV e ML non vengano modificate. Successivamente, posizionare una pipetta di vetro sterile contenente la soluzione virale sul riferimento RRV per zero riferimento anteroposteriore. Far avanzare la pipetta lungo la sutura sagittale fino a raggiungere la coordinata anteroposteriore scelta.
Segna questo punto con una matita sterile e solleva l'ago. Praticare con cautela un piccolo cerchio attorno alla posizione contrassegnata per evitare di rompere il seno sagittale superiore e rimuovere il pezzo di cranio con una piccola pinza. Quindi, utilizzando la mediana del seno sagittale superiore come riferimento mediolaterale, spostare la pipetta nella posizione e abbassarla fino a toccare la dura madre come riferimento dorso-ventrale.
Creare una leggera rottura nella dura madre e abbassare la pipetta nella posizione dorso-ventrale preferita. Iniettare la quantità specificata di virus adeno-associati o vettori AAV nel cervello e rimuovere la pipetta. Libera il mouse dalle barre auricolari, quindi chiudi la pelle utilizzando clip chirurgiche.
Trasferisci l'animale in una gabbia riscaldata separata per riprendersi. Tieni d'occhio il recupero del mouse. Una volta ripreso conoscenza, riportalo nel suo recinto originale quando si è completamente ripreso.
