Iniziare preparando una soluzione madre bicellare al 10% contenente i lipidi e il detergente. Per fare ciò, prendi il lipide pre-essiccato, che è una miscela di cinque mole di colesterolo e 95 percento di DMPC, e aggiungi la soluzione detergente CHAPSO in acqua deionizzata. Utilizzando un forno a bagnomaria, risospendere la miscela di detergente lipidico sonicandola in acqua ghiacciata a tensione continua fino a quando la soluzione non è limpida.
Quindi, con l'aiuto di un filtro centrifugo da 0,2 micron, rimuovere eventuali componenti non disciolti. Successivamente, lavorando sul ghiaccio, combinare la soluzione madre bicellare risultante con il campione proteico pre-preparato con un rapporto volumetrico da uno a quattro. Incubare la miscela di bicelle proteiche con ghiaccio per 30 minuti.
Per la cristallizzazione, in una piastra a 48 pozzetti miscelare 0,5 o un microlitro della miscela di bicelle proteiche con un volume uguale di soluzione del serbatoio di cristallizzazione. Quindi impostare la cristallizzazione in una modalità di diffusione del vapore a goccia sospesa utilizzando la piastra a 48 pozzetti e incubare la configurazione di cristallizzazione a 20 gradi Celsius. Il giorno seguente, controllare i vassoi di cristallizzazione per assicurarsi che il vetro di copertura sia sigillato correttamente.
Controllare la crescita dei cristalli almeno una volta al giorno utilizzando uno stereomicroscopio da tavolo dotato di polarizzatore. Infine, immergere i cristalli proteici in malato di sodio da 0,2 molari e congelarli in loop criogenici da 50 o 100 micrometri utilizzando azoto liquido. I cristalli maturi adatti alla raccolta dei dati di solito apparivano entro una o due settimane e generalmente avevano le dimensioni di 50 micron per 100 micron per due micron.
