Per iniziare, raccogli i campioni di urina da individui sani. Centrifugare 12 millilitri di campione in una provetta conica da 15 millilitri per eliminare i detriti cellulari nei grandi corpi apoptotici. Quindi, trasferire 10 millilitri di surnatante in una nuova provetta da 15 millilitri.
Aggiungere al campione un millilitro di tampone di carico e 200 microlitri di liquame di microsfere di trappola EV. Incubare il campione a temperatura ambiente per 30 minuti con rotazione da un'estremità all'altra. Per pellettare il campione, posizionare la provetta conica da 15 millilitri su un rack separatore magnetico.
Rimuovere con cautela il surnatante e risospendere le perle in un millilitro di tampone di lavaggio. Quindi, trasferire la sospensione in una provetta da microcentrifuga da 1,5 millilitri e pipettare delicatamente per risospendere la vescicola extracellulare o le perle legate alle vescicole extracellulari. Posizionare la provetta per microcentrifuga su un rack separatore magnetico per provette da 1,5 millilitri.
Utilizzando una pipetta P200, aspirare con cautela il surnatante. Ora, lava le perline con un millilitro di tampone di lavaggio, seguito da due lavaggi con un millilitro di PBS a temperatura ambiente. Incubare le perle con 100 microlitri di trietanolammina da 100 millimolari appena preparata per cinque minuti.
Utilizzando un rack separatore magnetico per provette da microcentrifuga da 1,5 millilitri, raccogliere la soluzione elusa contenente EV. Dopo aver combinato le soluzioni eluse, essiccare l'eluit, utilizzando un concentratore centrifugo sottovuoto a quattro gradi Celsius.
