Dissociation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

Per iniziare, sezionare il cervello e il tessuto del midollo spinale e conservare la sospensione cellulare su ghiaccio. Quindi preparare un volume appropriato di miscela enzimatica-1 e 2. Trasferire 1.950 microlitri di miscela enzimatica-1 nella provetta C e aggiungere i pezzi di tessuto della sospensione cellulare del SNC.

Quindi aggiungere 30 microlitri di miscela enzimatica-2 al tubo a C. Chiudere bene i tubi a C e fissarli capovolti sul manicotto del dissociatore di celle con riscaldatori. Eseguire il programma appropriato e osservare per almeno cinque minuti per assicurarsi che tutti i tubi girino alla stessa velocità.

Nel frattempo, posizionare un colino da 70 micron su un tubo da 50 millilitri e pre-inumidire il filtro con due millilitri di DPBS. Al termine del programma, staccare le provette C dal dissociatore e centrifugare i campioni a 300 g per un minuto a quattro gradi Celsius. Risospendere il campione e applicarlo al colino pre-inumidito.

Aggiungere 10 millilitri di DPBS freddo al tubo C vuoto. Mescolare e aggiungere la sospensione sul colino corrispondente. Dopo aver scartato i filtri, centrifugare nuovamente la sospensione cellulare per 10 minuti, quindi aspirare con cura il surnatante per ottenere un pellet cellulare.