Isolation of CNS Cell Types Using Magnetic Beads in Naive and EAE Mice

Per iniziare, dividere la sospensione di cellule del SNC di topo purificate e non diluite in due frazioni per ulteriori isolamenti di microglia e oligodendrociti. Quindi aggiungere microsfere marcate magneticamente specifiche per l'antigene di superficie per diversi tipi di cellule del SNC alla rispettiva sospensione cellulare. Posizionare la colonna nel campo magnetico, equiparare la colonna, quindi aggiungere la sospensione cellulare risultante sulla colonna.

Le celle etichettate magneticamente verranno mantenute all'interno della colonna e le celle non etichettate verranno attraversate. Dopo aver rimosso la colonna dal campo magnetico, svuotare le cellule marcate magneticamente dalla colonna in un tubo come frazione cellulare selezionata positivamente. Dividere il flusso negativo dagli oligodendrociti in due frazioni per ulteriori isolamenti di neuroni e astrociti.

L'analisi della citometria a flusso utilizzando marcatori specifici del tipo di cellula combinati con la discriminazione delle cellule vive o morte ha prodotto microglia, oligodendrociti, astrociti e neuroni. La caratterizzazione fenotipica delle diverse popolazioni cellulari ha dimostrato che sono state ottenute sospensioni a singola cellula con circa il 90% di purezza e vitalità per tutti i principali tipi di cellule residenti nel SNC.