Per iniziare, centrifugare il sangue umano a 120 G per 20 minuti a temperatura ambiente per rimuovere le cellule del sangue. Quindi trasferire la metà superiore del surnatante in una nuova provetta. Quindi, centrifugare il plasma ricco di piastrine per rimuovere le piastrine e trasferire la metà superiore del surnatante in una nuova provetta.
Quindi rimuovere i detriti cellulari centrifugando la piastrina nel nostro plasma a 13.000 G per due minuti. Trasferire la metà superiore del surnatante in una nuova provetta. Accendere l'analizzatore di coaguli per rilevare la vescicola extracellulare o il tempo di coagulazione attivato da EV e preriscaldare lo strumento a 37 gradi Celsius.
Installare la sonda monouso e la coppetta reattiva. Quindi avviare la procedura di controllo qualità della macchina. Dopo l'esecuzione del controllo di qualità, immettere le informazioni di esempio nel sistema.
Quindi aggiungere 200 microlitri di plasma ricco di EV alla coppetta del test, seguiti da 20 millimolari, 170 microlitri di cloruro di calcio. Fare clic sul pulsante di avvio, chiudere il coperchio e consentire alla sonda di rilevare la variazione della resistenza del campione. I campioni di EV non qualificati mostrano un cluster distinto con una dimensione delle particelle leggermente più grande vicino al gate di EV.In contrasto, i campioni qualificati ricchi di EV hanno mostrato la maggior parte dei segnali all'interno del gate di EV come un singolo gruppo.
Un aumento della concentrazione di EV ha ridotto il tempo di coagulazione attivato da EV, mentre una diminuzione della concentrazione di EV ha prolungato il tempo di coagulazione attivato da EV. I campioni di plasma ricchi di EV di pazienti con preeclampsia, fratture dell'anca e cancro ai polmoni hanno avuto un tempo di coagulazione attivato da EV significativamente più breve rispetto ai volontari sani.
