Per iniziare, allaccia il topo anestetizzato supino nel sistema di imaging con il muso in un cono nasale. Posiziona il mouse in modo che la parte inferiore delle gambe sia estesa e le ginocchia siano leggermente rivolte in aria. Aprire il software compatibile sul computer del sistema di imaging.
Dal pannello di controllo dell'acquisizione, fare clic su inizializza per riscaldare il sistema e attendere che la spia della temperatura diventi verde. Quindi fare clic su Imaging Wizard. Dopo aver fatto clic sulla coppia di filtri, assicurarsi che l'impostazione sia configurata per l'epi-illuminazione.
Quindi premere Avanti. Dall'elenco a discesa, individuare la sonda di interesse per selezionare le impostazioni corrette di eccitazione ed emissione, quindi fare clic su Avanti. Scegli il mouse per l'immagine del soggetto.
Nei parametri di esposizione, assicurarsi che le impostazioni automatiche siano selezionate e che le opzioni di fluorescenza e fotografia siano selezionate. Nell'elenco di controllo del campo visivo, selezionare D a 22,6 centimetri e premere Avanti. Dopo aver verificato che tutte le impostazioni siano corrette, premere il pulsante della sequenza di acquisizione e verificare che l'immagine abbia un'esposizione adeguata.
Per analizzare l'immagine, posizionare un cerchio della regione di interesse di dimensioni coerenti su ciascuna articolazione del ginocchio sull'immagine in bianco e nero. Calcola l'efficienza radiante totale e l'efficienza radiante media per ciascuna articolazione del ginocchio. Se l'efficienza radiente viene calcolata anche sulle gambe controlaterali, normalizzare i dati dividendo la misura dell'efficienza radiente per la gamba lesionata per quella della gamba controlaterale.
L'imaging in riflettanza a fluorescenza ha mostrato un'attività proteasica significativamente maggiore nelle articolazioni danneggiate dei topi rispetto ai topi non lesionati. Le articolazioni lesionate hanno mostrato un'efficienza radiante media maggiore del 43% rispetto alle articolazioni controlaterali e alle articolazioni di topi non lesionati. Nelle articolazioni lesionate è stata osservata un'efficienza radiante dal 30 all'80% in più, rispetto alle articolazioni controlaterali a due settimane dall'infortunio.
Al contrario, le articolazioni operate chirurgicamente hanno mostrato un'efficienza radiante maggiore del 300% alla quarta settimana rispetto alle articolazioni controlaterali, suggerendo un notevole effetto confondente della chirurgia.
