Per iniziare, riempi ogni ago con cinque microlitri di soluzione di nanocorpi GFP marcata con Alexa Fluor. Posizionare un vetrino coprioggetti di 25 x 25 millimetri su una superficie di vetro per vetrini. Pipettare 40 microlitri di olio di alocarburo sul vetrino e distribuirlo lungo il perimetro del vetrino coprioggetti.
Sotto il microscopio per iniezione, posizionare la punta dell'ago contro il bordo del vetrino coprioggetti immerso nell'olio. Regolare di conseguenza la pressione dell'aria di iniezione della PicoPump. Sostituire il vetrino vuoto con il vetrino embrionale di Drosophila preparato.
Impostare la punta dell'ago per iniezione perpendicolarmente all'asse antero-posteriore dell'embrione. Utilizzare il manipolatore dello stadio XY per guidare gli embrioni verso l'ago fino a quando la punta raggiunge il centro del tuorlo e pompare due o tre volte per infondere gli anticorpi nel tuorlo. Con il manipolatore di fase XY, allontanare gli embrioni dall'ago dopo l'iniezione e passare all'embrione successivo.
Lasciare incubare gli embrioni a 25 gradi Celsius fino a raggiungere lo stadio di sviluppo desiderato. Dopo l'incubazione, identificare gli embrioni sotto una lente a bassa potenza con illuminazione in campo chiaro e passare a una lente 40X o 63X per l'imaging fluorescente dal vivo ad alta risoluzione. Dopo l'iniezione, il rapporto segnale/rumore del recettore notch migliora in modo significativamente paragonabile alla qualità del segnale dell'immunofluorescenza.
Inoltre, l'iniezione di anticorpi ha permesso la caratterizzazione temporale della localizzazione della tacca a intervalli di 45 secondi senza un'apparente perdita di intensità del segnale in una finestra di imaging di cinque minuti. L'imaging dal vivo della fosfotirosina embrionale ha mostrato che la fosforilazione della tirosina è altamente arricchita a livello delle giunzioni tricellulari. Inoltre, una nuova seconda popolazione di segnale di fosfotirosina è stata osservata sotto il centro della membrana apicale.
L'imaging a due colori ha rivelato che questa popolazione di segnale di fosfotirosina è vicina alla miosina mediale. Inoltre, la popolazione mediale di fosfotirosina ha mostrato modelli di coalescenza e dissipazione pulsatile simili, come mostrato per la miosina mediale.
