Per estrarre i dati del Bradford Assay dalle immagini della micropiastra registrate utilizzando la fotocamera dello smartphone, scaricare l'immagine software J e il plug-in ReadPlate disponibile come file di testo. Dopo aver aperto l'immagine J, fai clic su Plugin seguito da Installa e seleziona il file di testo del plugin ReadPlate scaricato. Impostare i parametri di misurazione facendo clic su Analizza, quindi su Imposta misure e selezionando le opzioni: Area, Deviazione standard, Valore di grigio minimo e massimo, Valore di grigio medio, Valore di grigio modale.
Nella parte inferiore della finestra, imposta Reindirizza su Nessuno e Decimale su zero su 9 su 3. Vai a File. Fare clic su Apri e selezionare l'immagine della micropiastra scattata con lo smartphone.
Vai su Plugins seguito da ReadPlate. Leggere le istruzioni e fare clic su OK. Selezionare il numero di pozzetti come 96. Utilizzando lo strumento di selezione rettangolare caricato automaticamente dal plugin, crea un rettangolo che inizia al centro del riquadro A1 e termina al centro del riquadro H12, quindi fai clic su OK. Selezionare il canale blu e fare clic su OK. Quindi confermare i parametri predefiniti facendo clic su OK. Controlla se il software ha delineato un'area all'interno di ciascun pozzetto e se le aree selezionate non coprono aree con ombre o riflessi anomali.
Una volta selezionato, fare clic su OK. Salvare i risultati prima di ripetere lo stesso per il canale verde. Calcola il rapporto Blu-Verde utilizzando la modalità per ciascun colore. I dati di colore RGB ottenuti automaticamente dall'immagine di una micropiastra hanno mostrato l'aumento tipico dei valori di blu e una diminuzione dei valori di rosso e verde per lo standard BSA.
Inoltre, i dati cromatici estratti dall'immagine riflettevano accuratamente le letture di assorbanza registrate a 450 e 590 nanometri. La curva standard ottenuta con i dati di colore estratti che raffigurano il segnale rispetto alla concentrazione di BSA è risultata lineare come previsto. È stata ottenuta una relazione lineare tra la diluizione del campione e il segnale sia per le letture dell'assorbanza che per i dati di colore estratti in due diversi campioni proteici.
Per entrambi i campioni proteici, alcune delle diluizioni non erano all'interno dell'intervallo lineare della curva standard. Tuttavia, dopo aver ignorato questi punti, i livelli di proteine calcolati utilizzando i dati RGB per entrambi i campioni corrispondevano a quelli calcolati utilizzando le letture dell'assorbanza.
