Iniezione intranodale di cellule B16F10-GP nel linfonodo inguinale dei topi

Iniziare aspirando 20 microlitri di sospensione di cellule di melanoma B16F10-GP utilizzando una siringa da insulina da 100 U. Rimuovere le bolle dalla siringa. Successivamente, in un topo che ha subito un intervento chirurgico di resezione tumorale, iniettare la sospensione cellulare in un linfonodo inguinale.

Inserire l'ago dall'estremità distale del linfonodo e spostarlo lentamente al centro del linfonodo. Osservare un significativo gonfiore del linfonodo che mostra che il fluido viene iniettato accuratamente. Iniettare un volume uguale di PBS nel linfonodo inguinale sull'altro lato.

Suturare l'incisione con una sutura 3-0. Disinfettare la pelle che circonda la ferita con iodio povidone, quindi posizionare il topo in una gabbia pulita e mantenere il calore utilizzando la luce infrarossa. Tenere il mouse in posizione di decubito laterale e monitorare continuamente fino a quando non viene ripreso conoscenza.

Dopo l'impianto con cellule B16F10-GP, sono state osservate metastasi linfonodali mediante colorazione con ematossilina ed eosina. Nella fase iniziale, il linfonodo metastatico ha mostrato un'occupazione parziale da parte delle cellule tumorali con alcune aree ancora contenenti linfociti non colpiti. Nella fase avanzata, il linfonodo metastatico era pieno di cellule tumorali accompagnate da angiogenesi tumorale.

Inoltre, la frequenza delle cellule T CD8 positive antigene-specifiche nel sangue periferico era del 2,81% nella fase iniziale, che è scesa all'1,48% nella fase avanzata. È interessante notare che, mentre la percentuale di cellule T CD8 positive è rimasta stabile nei linfonodi non metastatici, è stata temporaneamente aumentata nel linfonodo metastatico nella fase iniziale, ma è diminuita bruscamente nella fase avanzata.