Per iniziare, rimuovere la matrice della membrana basale scongelata dal ghiaccio. Aggiungere il volume calcolato della matrice della membrana basale alle singole cellule derivate dalla biopsia gastrica e mescolare delicatamente pipettando su e giù per circa 10 secondi. Quindi, utilizzando una pipetta, trasferire rapidamente aliquote di 50 microlitri della matrice e della miscela cellulare al centro dei singoli pozzetti in una piastra di coltura tissutale da 24 pozzetti.
Coprire immediatamente la piastra e, con un unico movimento fluido, capovolgere la piastra. Posizionare la piastra invertita in un incubatore per colture tissutali a 37 gradi Celsius per 35 minuti per consentire la polimerizzazione della matrice della membrana basale. Quindi aggiungere 500 microlitri di terreno organoide gastrico preriscaldato a ciascun pozzetto, assicurandosi che la parte superiore di ciascuna cupola sia completamente immersa nel terreno.
Gli organoidi sono generalmente identificabili entro 10 giorni dalla semina delle singole cellule. Entro il 20° giorno, sono grandi e in genere devono essere attraversati. Il numero di organoidi corporei e antrali raggiunge il picco al giorno 10 dopo la semina prima di diminuire, anche se non in modo significativo.
Gli organoidi generati dal tessuto bioptico del mantello hanno mostrato un tasso di crescita maggiore rispetto agli organoidi generati dal tessuto bioptico del corpo. In diversi pazienti, è stata tipicamente osservata una diversità di morfologia degli organoidi in ogni singola cupola. Tuttavia, in media, la spasticità degli organoidi ha mostrato poche variazioni.
