Trasferire un pellet immunitario arricchito con cervello di topo da una provetta da 15 millilitri a una piastra a fondo rotondo a 96 pozzetti. Dopo aver centrifugato la piastra a 500 G per cinque minuti, rimuovere il surnatante agitandolo. Risospendere le cellule in 100 microlitri di tampone FACS, quindi trasferire 10 microlitri da ciascun pozzetto nei pozzetti di controllo.
Centrifugare a 500 g per cinque minuti. Dopo aver rimosso il surnatante dalle celle centrifugate, aggiungere 50 microlitri di blocco FC a doppia concentrazione. Incubare per 10 minuti su ghiaccio.
A questo punto, aggiungere 50 microlitri della miscela principale di anticorpi al doppio della concentrazione finale desiderata e incubarla su ghiaccio al buio. Quindi, aggiungere 200 microlitri di tampone FACS a ciascun pozzetto e centrifugare a 500 G per cinque minuti. Scartare il surnatante agitando, quindi lavare le cellule in 300 microlitri di tampone FACS.
Centrifugare e risospendere le cellule in 200 microlitri di tampone FACS. Infine, trasferire la sospensione in una provetta di selezione del flusso contenente 300 microlitri di tampone FACS.
