Analizza il pannello degli anticorpi, conferma che il citometro ha un minimo di quattro laser, inclusi rosso, giallo, blu e viola. Stabilire la matrice di compensazione con perline di compensazione o controlli a singola cella di colorazione. Per calibrare e standardizzare, eseguire le perle fluorescenti arcobaleno all'inizio di ogni esperimento regolando la tensione del tubo fotomoltiplicatore fino a quando i picchi delle microsfere non si allineano con i valori target degli esperimenti precedenti.
Impostare la tensione e il guadagno del tubo fotomoltiplicatore per l'esperimento. Quindi utilizzare le perle di compensazione catturate dagli anticorpi per stabilire una matrice di compensazione. Successivamente, tracciare l'area di dispersione laterale su log rispetto all'altezza di dispersione in avanti su lineare in un dot plot, eliminare i detriti e selezionare la dimensione della cella utilizzando il gate S1, scegliere le celle singolette in un dot plot una larghezza di dispersione in avanti rispetto all'altezza di scatter in avanti con il gate S2.
Per stabilire i cancelli del quarto piano, utilizzare l'FMO pertinente per ciascun canale del quarto piano. Con istogrammi a parametro singolo determinare il segnale positivo in ciascun canale e stabilire le porte di conseguenza. Registrare attentamente i campioni utilizzando la strategia di gating stabilita.
Identificare la microglia utilizzando il segnale P2 RY 12 plus e determinare l'espressione proteica nel rispettivo canale solo per la microglia. Stabilire i gate di analisi sull'interfaccia utente del software di analisi del citometro replicando la stessa strategia di gating utilizzata durante la registrazione. Utilizzare la funzione di aggiunta di statistiche per selezionare la mediana per la popolazione di interesse sull'altezza del canale compensata.
Esporta i valori MFI per i rispettivi canali in un foglio di calcolo utilizzando l'editor di tabelle per ulteriori analisi statistiche. Il trattamento con lipopolisaccaridi ha indotto un aumento dell'acetilazione dell'istone tre lisina 27. Quando l'MFI è normalizzato all'interno del sesso, l'analisi dell'istogramma delle cellule colorate ha mostrato popolazioni normalmente distribuite con spostamenti cellulari verso una maggiore fluorescenza.
Un aumento simile dell'acetilazione dell'istone tre lisina 27 è stato osservato nelle cellule colorate.
