Per iniziare, sposta i cuccioli in una gabbia separata lontano dalla diga mentre li maneggi. Prima di iniziare la procedura di iniezione, utilizzando il microscopio da dissezione, confermare lo spazio intervertebrale o, come minimo, la linea mediana del canale spinale del cucciolo. Caricare una siringa da 25 o 10 microlitri con 10 microlitri della sostanza iniettabile desiderata come la formulazione del farmaco, la preparazione del virus o il liquido spinale artificiale di controllo, eccetera.
Una volta che l'animale è completamente anestetizzato, come confermato da movimenti del corpo ridotti o assenti, posizionare delicatamente i cuccioli sotto il microscopio. Con l'indice e il pollice sinistri palpare con attenzione lo spazio intervertebrale lungo la linea mediana, situato tra i cingoli pelvici bilaterali. Ruota leggermente la base della coda per aiutare a identificare la linea mediana della colonna vertebrale.
Inserire con cautela l'ago, inclinandolo a un angolo di 70-80 gradi nel punto in cui la rientranza si interseca, assicurandosi che rimanga allineato con il piano sagittale centrale. Quando l'ago entra in contatto con l'osso, diminuire gradualmente l'angolo a circa 30 gradi e far avanzare l'ago di circa due millimetri nello spazio intervertebrale. Iniettare lentamente fino a 10 microlitri di volume entro 50-60 secondi.
Tenere l'ago in posizione per 10-20 secondi dopo il completamento dell'iniezione. Estrarre l'ago con una leggera rotazione per evitare perdite. Dopo l'iniezione, posizionare il cucciolo su un termoforo per 10-15 minuti per consentire al cucciolo di riprendersi completamente e riscaldarsi.
L'iniezione intratecale di fast green nei neonati di tipo selvatico ha portato immediatamente alla distribuzione capillare della soluzione somministrata. I topi reporter YFP hanno mostrato un'espressione diffusa di YFP in tutto il cervello 10 giorni dopo l'iniezione intratecale di editing genetico basato su CRISPR-Cas9.
